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牛乳面临着微生物污染等食品安全方面的威胁。传统的细菌学培养方法检测牛乳中微生物耗时费力,无法适应市场的需求。本研究旨在利用流式分析技术快速定量检测牛乳中的细菌总数和大肠杆菌0157:H7。结果如下:1.牛乳中细菌总数检测:选用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌作为代表菌株进行研究,用SYTO 9和PI对细菌荧光标记,进行流式检测。结果显示,此方法的准确性良好,对PBS中的细菌总数的检测范围为103～108 CFU/mL,对牛乳中细菌总数的检测灵敏度可达到102CFU/mL。2.牛乳中大肠杆菌0157:H7的检测:用荧光抗体联合PI对其进行荧光标记,进行流式检测。结果显示,流式检测方法的准确性和特异性良好,在PBS中的检测范围为103～108CFU/mL,对牛乳中大肠杆菌O157:H7检测的灵敏度可达到 101 CFU/mL。3.检测牛乳中的细菌时,需要对牛乳中的杂质粒子的干扰进行排除。流式分析仪的散射光功能可以准确区分牛奶中的细菌和体细胞;牛奶的细菌纯化操作可以有效消除牛乳中的蛋白和脂肪颗粒。4.培养富集的方法可以提高流式分析技术检测细菌时的灵敏度。在营养肉汤中37℃培养6.5h后,大肠杆菌0157:H7浓度大约提高967±143倍。营养肉汤中37℃培养4.5h后,大肠杆菌的浓度大约提高92±25倍,金黄色葡萄球菌的浓度大约提高44±9倍,枯草芽孢杆菌的浓度大约提高372 ± 67倍。5.建立了流式分析技术检测牛乳中大肠杆菌0157:H7和细菌总数的方法,流程为:纯化——培养富集——荧光标记——流式检测分析。结论:流式分析技术能够极大程度上缩短检测时间,且能够达到牛乳样品快速定量检测的要求。