白色念珠菌MAPK新基因的克隆及其功能研究

来源 :中国科学院上海生物化学研究所 中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qqq398705749
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该论文围绕白色念珠菌MSPK新基因的克隆及其功能研究.根据所有MAPK保守区域VIB和IX的氨基酸序列合成了两个简并的引物,以SC5314染色体DNA作为模板,在非严谨条件下(37℃)进行PCR以筛选白色念珠菌中新的MAPK基因.研究者得到了两个新的MAPK基因片段,以这两个基因片段为探针从染色体DNA库中克隆了对应的全长基因,分别命名为CEK2和CSK1基因 ,序列分析表明它们是新的MAPK基因.CEK2基因全长1119bp;CSK1基因全长1193bp,其中有一个92bp的内含子.Cek2和Csk1分子中都含有ATP结合信号,在第7和第8亚结构域之间的L<,12>区有TNY序列.体外磷酸化激酶活力测定表明Cek2和Csk1都可以磷酸化牛髓鞘脂蛋白MBP 但不能磷酸组蛋H1.因此,CEK2和CSK1基因不仅从结构上,而且其编码的蛋白从激酶活性上属于MAPK基因家族.染色体定位分析表明,CSK1在SC5314、38690和门270中都定位在3号染 号染色体;CEK2在SC5314中定位在1号染色体,在38690和门270中定位在1号和2号染色体. 为进一步研究它们的功能,研究者利用同源重组的技术分别敲除了这两个基因.这两个基因的缺失都在一定程度上促进了白色念珠菌的菌的丝形成;而在白色念珠菌中表达CEK2基因,则部分抑制转化株的菌的丝形成.为了阐明CEK2和CSK1在信号传导途径中的上位关系,研究者在酿酒酵母stel2缺失株(L5573)和ste7缺失株(L5559)中表达CEK2和CSK1基因,并且利用 酿酒酵母two-hybrid system来检测Cek2和Csk1与Hst7(Ste7同源物)、Cpl(Stel2同源物)的 相互作用.
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