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骨骼肌损伤或缺损在临床的创伤治疗中较为常见,为了更好地探讨骨骼肌缺损的修复途径,本实验将自体的骨髓MSCs进行成肌诱导分化后复合HHK材料,对较大面积的骨骼肌缺损修复进行了研究。 在骨髓MSCs分离和体外扩增实验中,通过对细胞的形态学观察、生长曲线测定和细胞周期分析等,结果表明,在采用较低浓度血清的培养条件下,骨髓MSCs具有较好的生长和增殖特性,可以为后续体外诱导实验提供状态良好且足够数量的细胞来源。 在将体外扩增后的骨髓MSCs进行成肌诱导分化的实验中,经RT-PCR检测成肌基因的激活、流式细胞仪和免疫组化检测成肌细胞特异蛋白(结蛋白)的表达,结果表明浓度为10μmol/L的5-Aza可以使上述细胞发生成肌分化,诱导后可获得含较高比例成肌细胞的细胞群体,能够满足用于植入体内对缺损骨骼肌进行修复的需要。 在成肌诱导后的自体骨髓MSCs与HHK材料复合植入骨骼肌缺损动物模型实验中,首先对HHK材料在骨骼肌组织内的降解过程进行了研究,经光、电镜和Ub免疫组化观察,结果表明,植入后第3~6w为降解高峰期,到第9w材料的降解基本完成;在整个降解的过程中首先是通过体内的Ub系统将HHK材料降解成微小的碎片,再由巨噬细胞等通过吞噬完成清除。HHK材料作为植入的空间支架,因其具有一定的方向性,能够满足使植入的细胞按骨骼肌纤维走向进行生长的要求,实验研究发现其对植入细胞的生长方向具有较好的诱导作用。 骨骼肌缺损修复实验中分三个实验组进行比较,单纯植入HHK材料组、未诱导自体骨髓MSCs与HHK材料复合植入组和成肌诱导分化后自体骨髓MSCs复合HHK材料植入组。通过光、电镜形态学和骨骼肌肌球蛋白免疫组化观察,结合细胞示踪,结果表明,从植入部位新生骨骼肌纤维出现的时间以及密度分析,成肌诱导后自体骨髓MSCs复合HHK材料植入组获得的修复效果均优于前两组。