大肠杆菌中yigP基因功能的研究

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:marriamirror
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基因yigP位于大肠杆菌中与CoQ生物合成相关的两基因ubiE和ubiB之间。前期研究表明,大肠杆菌JM83染色体上yigP基因缺失后需携带含yigP基因的质粒后才能存活。本工作通过构建含yigP基因部分DNA片段的系列质粒,将之回补yigP基因缺陷株,功能验证实验发现606bp的yigP基因功能区可缩小至367bp的yigP-P4P2区。将此DNA片段接入不含外源启动子的质粒内,转化pMAK-ubiEB-yigP/JDP14-,高温培养替代质粒pMAK-ubiEB-yigP,从而获得缺陷株pUC-P4P2/JDP14-。   以菌株pUC-P4P2/JDP14的总RNA为模板,设计系列引物进行RT-PCR,发现yigP-P4P2 DNA片段能独立转录的最大产物约206nt。对这段转录产物进行序列分析,发现其不具备完整的翻译起始和终止结构,因而推测其可能通过编码反义RNA或干扰RNA,来对菌体的生长起调控作用。进一步对这段DNA序列进行相似性分析,发现其与大肠杆菌基因组中其他7个相关基因的转录产物有长度约为20bp的反义互补。其中rhsA基因的功能研究表明,过量表达会导致宿主细胞死亡。以上结果为yigP基因在大肠杆菌中调控作用的机制研究提供了良好基础。
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