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目的:本研究利用经典的新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemicbraindamage,HIBD)动物模型,观察HIBD前后神经细胞形态变化、神经细胞凋亡程度及Tau蛋白水平的改变,探讨新生大鼠HIBD早期Tau蛋白表达变化与脑损伤及细胞凋亡的关系。
方法:清洁级7日龄Wistar大鼠82只,随机分成假手术组(对照组,n=40)和缺氧缺血性脑损伤模型组(HIBD组,n=42)。参照Rice法单侧结扎新生大鼠左颈总动脉复制HIBD动物模型;假手术组(对照组)只切开颈部正中皮肤,分离但不结扎左侧颈总动脉;HIBD组及对照组大鼠置入低氧环境缺氧2小时,而后按时间随机分为3h、6h、12h、24h、48h组(n=8)。HE及嗜银染色后,光镜下观察。HIBD前后及不同时间组新生大鼠脑神经细胞的病理变化;原位切口末端标记的方法(Terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTP-biotininsitunickendlabeling,TUNEL)检测各组脑室周围白质与皮层凋亡细胞,免疫组织化学法测各组大鼠脑室周围白质与皮层微管相关蛋白Tau水平的动态变化情况,400倍视野下利用计算机图象分析系统进行神经细胞凋亡个数计数及Tau蛋白平均光密度值(averageopticaldensity,OD)测定,并统计学分析。
结果:HIBD模型制作过程中2只新生鼠死亡,其余大鼠行为学发生变化;HIBD新生大鼠脑HE病理检测示神经细胞减少,少数神经细胞收缩变性、核固缩,可见凋亡小体;HIBD新生大鼠脑嗜银染色示脑室周围白质及皮层神经细胞中存在神经原纤维的增粗、缠绕。TUNEL法染色,凋亡细胞核呈棕黄色。脑室周围白质与皮层对照组凋亡阳性细胞极少,与对照组比较HIBD组12小时凋亡细胞数增加(p<0.05),24小时达高峰(p<0.01),48小时凋亡细胞较24小时组有所减少,但仍高于对照组(p<0.05);对照组不同时间点组内对比凋亡细胞数差异无显著性(p>0.05),HIBD组不同时间点组内对比,3小时与12小时、24小时、48小时凋亡细胞数差异有显著性,6小时与24小时、48小时凋亡细胞数差异有显著性,其余组内对比无显著性差异。各实验组脑室周围白质与皮层Tau蛋白随着缺血时间的延长而表达增强,其中HIBD组3小时后OD值较对照组略有增加,无显著性差异(p>0.05);6小时、12小时、24小时后OD值逐渐增加,24小时达高峰,与对照组比有显著性差异(P<0.05),阳性染色强度较对照组均明显增强;48小时组OD值较24小时组略有减少,与对照组比仍有显著性差异(P<0.05)。对照组不同时间点区组内对比Tau蛋白OD值差异无显著性(P>0.05),HIBD组不同时间点区组内对比,3小时组与12小时、24小时、48小时组凋亡细胞数差异有显著性(P<0.05),其余组内对比无显著性差异。
结论:7日龄大鼠HIBD早期脑损伤导致神经细胞骨架破坏、神经原纤维增粗缠结;7日龄大鼠HIBD早期大脑皮层和脑室周围白质神经细胞凋亡个数12小时开始增加,24小时达高峰,48小时有所下降;7日龄大鼠HIBD早期大脑皮层和脑室周围白质Tau蛋白表达水平6小时开始升高,24小时达高峰,48小时有所下降;7日龄大鼠HIBD早期大脑皮层和脑室周围白质Tau蛋白水平随着神经细胞凋亡个数变化而发生变化,二者呈一致性改变。