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新城疫病毒(NDV)不同毒株毒力和致病性差异很大,对不同宿主的感染性也不同。长期以来,水禽一直被认为是NDV的天然贮存库,鹅、鸭等能携带病毒,但通常不表现任何临床症状,甚至对NDV强毒株具有坚强的抵抗力。但是自1997年以来,我国华南和华东地区相继报道发生了鹅源NDV,并有较高的发病率和死亡率,从而改变了NDV对水禽不具有致病性的观点。与鹅相比,鸭发生致病性ND的数量较少,但从最近几年的报道来看,鸭感染NDV并导致明显致病性的病例呈现日益增多的趋势。2000年以来,安徽、山东、江苏、福建、浙江、河北等地的鸭群发生ND的临床病例越来越多,严重影响我国养禽业的发展。水禽ND的发生与流行说明随着NDV宿主谱的不断扩大和新基因型的不断出现,NDV的毒力也在不断的变化,同时尚不能确定水禽ND病原的来源,对此病的防制又增加了新的难度。
鸭源致病性NDV的出现在病原学和流行病学有着重要的意义,本研究从全国不同地区分离到了18株鸭源NDV,并对从山东某种鸭场产蛋下降种鸭中分离的NDV09-023株进行了生物学特性的详细研究。
1.从全国不同地区的活禽市场、屠宰场及养殖场采集病料和棉试子,通过接种鸡胚、HA-HI试验及RT-PCR方法对病原进行了分离鉴定,成功分离到18株鸭源NDV毒株。对分离株的F基因主要功能区核苷酸序列和由其推导的氨基酸序列进行了同源性比较和变异分析,推导了F蛋白裂解位点的氨基酸序列,并根据其cds的1~389nt和1~374nt序列构建了系统进化树,确定了分离株的基因型。结果显示:按照遗传距离的远近,18个分离株分成两群,其中12个分离株和ClassⅠ NDV代表株有较近的遗传距离,属于ClassⅠ NDV中的基因3型,说明ClassⅠ NDV在我国的鸭群中已广泛存在;6个分离株和ClassⅡ NDV有较近的遗传距离,属于ClassⅡ NDV,分属于基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型三个不同的基因型。F蛋白裂解位点氨基酸序列显示15个分离株为弱毒,3个分离株为强毒。本次分离到的毒株包含四个基因型,既有ClassⅠ NDV,又有ClassⅡ NDV,既有强毒株,又有弱毒株,说明我国鸭源NDV的流行毒株、流行情况极为复杂。
2.对NDV09-023株进行了一系列生物学特性测定,毒力测定发现MDT为49.6h,ICPI为1.725,均符合OIE规定的NDV强毒株标准,序列分析发现F基因推导的F蛋白裂解位点氨基酸序列与NDV强毒株的特征性结构一致(112R-R-Q-K-R-F117),遗传进化分析表明在分类地位上属于ClassⅡ NDV基因Ⅶ型中的d亚型,生物学特性和F蛋白裂解位点氨基酸序列表明本分离株属于NDV强毒株。将本分离株株和3株NDV经典毒株灭活后加入弗氏佐剂制备灭活苗,分别免疫鸭和SPF鸡,采血制备单因子阳性血清,将4株病毒分别与相应的抗血清做交叉血凝抑制试验(Cross-HI),通过抗原比值来判断本分离株与NDV经典毒株之间的抗原差异,经测定,本分离株与La Sota株、宁夏株、F48E8株的抗原比值分别为0.904、0.856、0.932,说明它们之间存在相同的抗原成分,但同时存在抗原差异,差异不明显。通过对鸡和鸭的致病性与保护性实验发现,La Sota株疫苗完全可以预防本分离株对SPF鸡的感染,保护率达100%,同时对未免疫SPF鸡的致死率也高达100%,说明本分离株具有较强的致病性但可以用常规的疫苗进行预防,运用实时荧光定量PCR方法,在致死SPF鸡中的多个组织中发现了病毒,其中以盲肠扁桃体、腺胃含量最多;对鸭攻毒后发现,鸭能产生抗体但不排毒,在临床上不表现任何临床症状。