副流感病毒5型(PIV5)是一种不分节段的单股负链RNA病毒,属副黏病毒科、腮腺炎病毒属。其广泛存在于自然界,人和多种动物均可感染。据报道,PIV5在猪群中有较高的感染率,但相关的病原学、分子生物学及遗传进化分析等研究较少。鉴于此,本研究对本实验室保存的腹泻猪小肠组织样品进行病原分离,并对分离到的PIV5毒株进行F基因、全长基因组遗传进化分析及致病性研究,旨在为其诊断、防控及后期疫苗研究提供基础数据。利用Vero E6细胞通过盲传方法进行病毒分离,成功分离出5株副黏病毒。将分离到的病毒置于电镜下观察,发现副黏病毒样颗粒。5株毒株均可使鸡红细胞发生凝集,其血凝性能被鸡新城疫标准阳性血清抑制。进一步使用二代测序及RT-PCR方法对其进行鉴定,分析结果表明这5株毒株均为猪源PIV5毒株,分别被命名为HLJ2015/DP1-1/PIV5、HLJ2015/DP2-1/PIV5、SH/2015/122/PIV5、HuB/YC/2015/PIV5和JX/2015/1221/PIV5。为明确PIV5遗传变异情况,对5株猪源PIV5毒株F基因进行扩增与测序,对序列进行遗传进化分析。而后选择PIV5 SH毒株进行病毒全长基因组测序及遗传进化分析。F基因序列分析结果显示,5株分离株核苷酸同源性为99.6%~99.9%,推导的氨基酸同源性为98.9%~99.6%。与其他参考毒株进行比较发现,5株分离株与中国广州小熊猫源PIV5毒株(ZJQ-221)及韩国犬源PIV5毒株(1168-1)亲缘关系较近,核苷酸同源性分别为99.8%~100.0%和99.5%~99.8%。基因组序列分析结果表明,PIV5 SH毒株与传统毒株PIV5W3A核苷酸同源性为98.7%。F基因遗传进化树分析结果显示,5株毒株与PIV5 ZJQ-221及PIV5 1168-1亲缘关系较近,形成一个单独分支。全长基因组遗传进化树分析结果显示,PIV5 SH毒株同PIV5 1168-1毒株、中国三株分别从孟加拉虎、东北虎及小熊猫体内分离到的PIV5毒株(PIV5 HMZ、PIV5 SR、PIV5 ZJQ-221)具有较近的亲缘关系,5株毒株形成独立分支,与传统毒株PIV5 W3A亲缘关系较远。进一步以PIV5 NP、F及HN基因构建遗传进化树,其结果同基因组进化树结果基本一致。为进一步了解PIV5致病性,通过人工感染方法使BALB/c小鼠感染PIV5 SH毒株,动物实验结果表明PIV5对BALB/c小鼠不具有致病性。本研究于猪小肠组织样品中分离5株PIV5毒株,序列分析结果显示PIV5不同毒株间基因差异较小,表现出一定遗传稳定性。并且该病毒毒力较弱,感染小鼠后不致病。