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目的调查2015年7月至2017年12月泰安地区某些畜牧场和泰安市中心医院临床分离的大肠埃希菌中是否存在对碳青霉烯类抗生素或多黏菌素耐药的大肠埃希菌,耐药菌株是否分别携带NDM-1或mcr-1基因,同时筛查其他耐药基因的存在情况。本研究拟以大肠埃希菌为研究对象,初步阐明其在鸡鸭和人中的流行特征与传播规律,耐药谱特征和病原菌毒力多样性的遗传基础,为该病的防治提供理论依据。方法本研究主要搜集泰安市数个畜禽养殖场,从中分离到大肠埃希菌87株,筛选出非重复耐碳青霉烯大肠埃希菌1株,非重复耐多黏菌素大肠埃希菌27株;泰安市中心医院临床分离的大肠埃希菌共1598株,非重复耐碳青霉烯大肠埃希菌16株,目前临床标本尚未检测到多黏菌素耐药的大肠埃希菌。对于耐药细菌,我们用Autof ms1000质谱仪再次确定菌株均为大肠埃希菌,同时采用纸片扩散法、全自动药敏鉴定仪法(西门子 microscan96plus,BD PHOENIXTM System 和梅里埃 VITEK(?)2 COMPACT三种全自动微生物分析系统)和E-test法测定菌株对多黏菌素、亚胺培南、美罗培南、厄他培南、氨曲南、阿米卡星、左氧氟沙星、庆大霉素、复方新诺明、哌拉西林他唑巴坦、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、头孢西丁等抗菌药物的敏感性。利用改良Hodge实验和EDTA协同扩散实验检测17株细菌中产碳青霉烯酶的情况。然后采用聚合酶链反应(PCR)检测菌株的耐药基因(多黏菌素耐药基因,碳青霉烯酶基因,超广谱β内酰胺类耐药基因、氨基糖甙类耐药基因、喹诺酮类耐药基因)检测菌株中是否携带NDM-1或mcr-1耐药基因,同时是否携带其他耐药基因,并对实验菌株进行耐药基因测序,并采用全基因组测序(鸟枪法)对耐药基因进行验证。利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)对耐药菌株进行家禽与家禽间,人与人间,家禽与人间同源性分析,并利用多位点序列分型(MLST)做细菌分型和进化分析。通过接合实验检测耐药基因是否可以通过质粒进行水平传播。结果我们与合作单位从本地区数个畜禽养殖场分离到大肠埃希菌87株,1株耐碳青霉烯大肠埃希菌,这株细菌来源于鸡的肺组织;本实验在临床送检标本中共筛选出16株非重复耐碳青霉烯类抗生素大肠埃希菌,其中2株来自神经外科监护病房,2株来自普外科东区病房、2株来自儿内三、2株来自神经内科监护室、其他来自儿内科PICU、普外科西区病房、重症医学科病房、创伤手足外科东区病房、呼吸重症、妇二科病房、消化内二科病房、康复科病房。药物敏感性实验显示17株细菌均耐碳青霉烯类药物,实验株细菌的改良Hodge实验和EDTA协同扩散实验均为阳性。并且通过耐药基因筛选发现其中2株含blaNDM-1基因,其余15株含blaNDM-5基因,其余耐药基因检测情况在此不在赘述。PFGE发现17株细菌属于不同谱型,以85%为界,可分为12个不同的带型,临床标本不同耐药菌株间同源性为75.5%～100%;鸡9与临床标本菌株的同源性为71.1%。菌株间具有同源性较高标本,但是总体看来未发现绝对优势带型,说明菌株在基因水平上具有多态性。多位点序列分型(MLST)证实这 17 株细菌分属于 ST10、ST167、ST405、ST767、ST408、ST1284、ST2491、ST6082型。在17株细菌中,有13株细菌接合成功,细菌的部分耐药基因传递成功。我们与合作单位从本地区数个畜禽养殖场分离到大肠埃希菌87株,耐多黏菌素大肠埃希菌27株,这27株细菌来源于鸡/鸭的肺组织,药物敏感性实验显示细菌均耐多黏菌素药物,耐药基因筛选发现含blamcr-1基因。PFGE发现27株细菌属于不同谱型,以85%相似度为标准,可分为15个不同的带型,不同患病鸡鸭分离的菌株间同源性为67.1%～100%。菌株间具有同源性较高标本,但是总体看来未发现绝对优势带型,说明菌株在基因水平上具有多态性。多位点序列分型(MLST)证实这27株细菌分属于 ST767、ST155、ST457、ST48、ST4204、ST533、ST1638、ST101、ST6395、ST4408、ST1968、ST117、ST156、ST23、ST10,ST5912 型。在 27 株细菌中,有13株细菌接合成功,细菌的部分耐药基因传递成功。结论证实含“新德里金属一 β一内酰胺酶”基因是本地区耐碳青霉烯大肠埃希菌主要耐药因素之一,这种耐药基因可以在细菌之间传递,造成耐药性的传播,人与鸡中均有发现,并可在不同物种间传播。泰安地区家禽类存在多黏菌素耐药的大肠埃希菌,比例为31%,证实主要耐药因素是由于含blamcr-1基因,即使泰安地区人中还未发现,但是这种耐药基因可以相互在细菌之间传递,造成耐药性的传递。