【摘 要】
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机体抗氧化防御体系包括酶学和非酶学机制。酶学机制包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)等。大量的证据表明GPx在清除氢过氧化物的能力强于
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机体抗氧化防御体系包括酶学和非酶学机制。酶学机制包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)等。大量的证据表明GPx在清除氢过氧化物的能力强于CAT。分子生物学和遗传学的证据都表明许多疾病的发生、发展都和活性氧(ROS)有关,如白内障、克山病、心脑血管疾病和衰老等,并且在发病过程中GPx的活力都不同程度的下降。因此GPx作为抗氧化药物前体有着广阔的应用前景。硒代半胱氨酸(Sec)是GPx催化必需基团,被认为是第二十一种氨基酸,它以UGA为对应密码子。Sec掺入蛋白质的机制目前还不十分清楚。实现生物硒蛋白的原核表达尚有困难,这限制了GPx的生物医学应用。因此我们应用化学和生物学技术模拟GPx的酶学行为。模拟GPx不仅能阐明酶的机理,而且具有实际应用价值。如何产生高催化效率的GPx人工酶,对化学家和生物学家是一个长期的挑战。我们从GPx的结构出发,利用化学和生物学的方法和原理,制备出新颖的高活力的GPx人工酶。 1.GSH含硒印迹蛋白质模拟GPx 设计并改造天然存在的酶对阐明酶催化反应机理和产生工业用途的酶非常重要。因为通过异源表达产生含硒蛋白质极其困难,因此如何产生具有高催化效率和底物选择性的半合成含硒酶对科学家是巨大的挑战。为了获得高催化效率和高底物选择性的半合成含硒酶,我们选用枯草杆菌蛋白酶(subtilisin Carlsberg)为蛋白骨架,通过化学修饰转换为硒化枯草杆菌蛋白酶,然后对其活性部位进行改造制备出具有GSH结合部位的含硒印迹酶。我们的策略不同于以前的生物印迹的方法,我们用共价键(Se-s键)连接模版分
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