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骨形态发生蛋白(Bone Morphogenetic Proteins, BMPs)是转化生长因子-β(TGF-β)超家族的成员,它是多功能蛋白,在脊椎动物和无脊椎动物的骨骼发育及器官形成中具有重要作用,并且参与动物胚胎的发育、免疫系统、卵泡发育以及生殖发育[1]。骨形态发生蛋白发挥生理功能离不开骨形态发生蛋白受体[5]。BMPR-1B基因编码区的突变(A746G)导致BMPR-1B基因Q249R(谷氨酰胺→精氨酸)的突变,该突变位于胞内激酶信号区,BMPR-1B基因的部分失活其最终结果是使携带Fec基因的母羊的卵泡颗粒细胞加快分化,BMPR-1B基因的部分直接导致与其连接的配体BMP-4和GDF-5影响对类固醇生产作用的反应,进而使卵泡成熟速度加快,排卵数增加[2]。这也就意味着Q249R位点突变抑制了BMPR-1B的功能,突变后产生的BMPR-1B对于卵巢卵泡颗粒细胞的抑制作用随之减弱,所以在突变类型的绵羊体内会引起较高的排卵数。为获得有效干扰绵羊基的BMPR-1B的shRNA干扰分子,从绵羊卵巢组织中扩增了1515bpBMPR-1B基因全长编码区cDNA序列,添加HA标签序列后,插入Plex-mcs慢病毒质粒,构建Plex-BMPR-1B慢病毒表达载体,转染HEK293细胞,并与两个包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,用获得的重组慢病毒感染HEK293细胞；同时,将7个干扰分子与PLL-LentiLox3.7载体重组,并与三个包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,获得干扰分子的重组病毒颗粒。同时干扰内源性的绵羊卵泡颗粒细胞和感染整合Plex-BMPR-1B的HEK293细胞,进行qRT-PCR和Western blot检测。结果显示：(1)克隆得到的BMPR-1B基因的全长1515bp,其编码序列1509bp,编码503个氨基酸,符合预期的结果。(2)重组BMPR-1B蛋白在稳定整合Plex-BMPR-1B的HEK293细胞系中获得了稳定表达。(3)通过对两种细胞系的mRNA的检测,PLL-BMPR-1B-1306和PLL-BMPR-1B-1475干扰分子的干扰效果较好,干扰效率分别为99.86%和99.78%。(4)通过qRT-PCR和Western blot检测,本研究中设计的7个shRNA分子能抑制绵羊BMPR-1B基因表达水平68.3%-99.86%。本研究中设计的7个shRNA分子对绵羊BMPR-1B基因表达水平具有较明显的抑制效果,其中BMPR-1B-shRNA-1306和BMPR-1B-shRNA-1475干扰分子的干扰效果最好。干扰分子PLL-BMPR-1B-1306和PLL-BMPR-1B-1475干扰位置在绵羊BMPR-1B蛋白的丝氨酸和苏氨酸蛋白激酶催化结构域和激酶区,而PLL-BMPR-1B-1306的干扰位置与Q294R氨基酸在同一个区域,具有一定的研究意义。本研究为多胎品种培育、转基因等研究提供理论基础,但是干扰BMPR-1B基因后对其上下游信号分子乃至整个BMP/SMAD信号通路产生的影响还需进一步深入研究。