人参是多年生草本植物,属于五加科人参属(Araliaceae)。从人参根中提取的人参皂甙(ginsenosides,GS)是人参的主要活性成分之一,具有广泛的免疫调节作用,能增强自然杀伤细胞活性、提高巨噬细胞的吞噬能力和增强动物机体对胸腺依赖性抗原的初次抗体应答能力等。但GS价格相对较高,使其在畜牧生产上的推广应用受到很大的限制。研究发现,人参的茎、叶和种子中也含GS。其中,人参茎叶皂甙(saponin extracted from ginseng stems and leaves,GSL)是从人参的茎叶中提取的皂甙成分,其价格相对低廉,且与人参根皂甙具有相似的药理作用,所以对GSL的开发利用具有重要的经济价值。本研究以灭活Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)为抗原,通过GSL单独或与油佐剂配伍来评价对FMDV抗原的免疫佐剂作用,为进一步利用GSL提高FMD疫苗的免疫效果提供依据。研究内容包括主要以下三部分:　　 1.人参茎叶皂甙对Asia-Ⅰ型口蹄疫抗原的免疫佐剂作用　　 将雌性ICR小鼠随机分组,分别皮下注射生理盐水、灭活Asia-Ⅰ型FMDV抗原、不同剂量的GSL(1μg、5μg、10μg、20μg、50μg、100μg、500μg)+FMDV抗原,白油+FMDV抗原,三周后加强免疫一次。于二免后第二周采集血样,用间接酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中抗FMDV IgG总抗体水平。实验结果表明,与抗原对照组相比,不同剂量的GSL+FMDV抗原都能够提高小鼠血清中抗FMDV抗体水平,其中10μg剂量的GSL+FMDV抗原能显著提高小鼠血清中抗FMDV抗体水平(P＜0.05),说明10μg剂量的GSL对Asia-Ⅰ型FMDV抗原的免疫佐剂作用最强。另外,免疫后的小鼠在食欲、精神状态和行为方面均表现正常,无明显异常变化,说明GSL作为免疫佐剂皮下注射是比较安全的。2.含人参茎叶皂甙的Asia-Ⅰ型口蹄疫抗原的油佐剂疫苗的制备方法研究　　 采用两种方法制备含GSL的FMD油佐剂疫苗,方法一是将抗原(含吐温-80)和油佐剂(含硬脂酸铝,司班.80和白油)按1∶1的比例进行乳化制成FMD油佐剂疫苗,然后与不同浓度的GSL(GSL的终浓度分别为:0.5 mg/ml、1 mg/ml、5mg/ml)溶液进行乳化,制成含GSL的FMD油佐剂疫苗;方法二是在FMDV抗原溶液中加入不同浓度的GSL(GSL的终浓度分别为:0.5 mg/ml、1 mg,/ml、5 mg/ml)溶液后再与等量的油佐剂进行乳化制成含GSL的FMD油佐剂疫苗,并对两种方法制备成的含GSL的FMD油佐剂疫苗分别进行了稳定性观察。结果发现,在方法一中,终浓度是0.5 mg/ml和1 mg/ml的GSL能与先前制备的FMD油佐剂疫苗成功乳化,获取物理性状比较稳定的含GSL的FMD油佐剂疫苗;而在方法二中,只有终浓度为0.5 mg/ml的GSL与FMDV抗原溶液混合后能与油佐剂成功乳化,获取物理性状比较稳定的含GSL的FMD油佐剂疫苗。实验结果说明,在含GSL的Asia-Ⅰ型FMDV抗原的油佐剂疫苗制各中,方法一更利于含GSL的Asia-Ⅰ型FMDV抗原油佐剂疫苗的制备。3.含人参茎叶皂甙的Asia-Ⅰ型抗原油佐剂疫苗的免疫效果　　 将雌性ICR小鼠随机分为5组,分别皮下注射生理盐水,FMDV,GSL(10μg)+FMDV,白油+FMDV,GSL(10μg)+白油+FMDV,三周后加强免疫一次。于二免后第二周采集血样,分离血清,用间接ELISA法检测血清中抗体水平,并检测了免疫小鼠的脾淋巴细胞在刀豆蛋白(ConA)和脂多糖(LPS)刺激下体外细胞增殖反应情况和ConA刺激后的脾淋巴细胞上清液中的细胞因子产生情况。结果表明,与白油组相比,GSL+白油组能提高小鼠血清中生IgG总抗体和抗体亚类水平,其中能显著提高小鼠血清中IgG2a和IgG2b水平(P＜0.05);与白油组相比,GSL+白油组提高了免疫小鼠的脾淋巴细胞在ConA刺激下体外增殖反应能力,显著提高了免疫小鼠的脾淋巴细胞在LPS刺激下体外增殖反应能力,而且也显著提高了ConA刺激后脾淋巴细胞产生IFN-γ和IL-5的水平(P＜0.05),表明GSL与白油佐剂具有组合效应,不但能提高机体的体液免疫反应,而且也能提高机体的细胞免疫反应。