环状RNAs在儿童急性B淋巴细胞白血病中的诊断和预后价值研究

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目的:随着分子诊断技术的发展,分子标志物在儿童急性B淋巴细胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)的诊断和预后中发挥重要作用,但仍有20-30%的B-ALL缺乏明确的疾病分子分型。本研究旨在探索新兴RNAs分子环状RNAs(circular RNAs,circ RNAs)在儿童B-ALL中的诊断和预后价值。方法:通过查阅文献,筛选出目标circ RNAs(hsacirc0004123、hsacirc0001857、hsacirc0001708)。提取B淋巴母细胞系HMy2.CIR总RNA,反转录合成c DNA。以c DNA为模板,分别扩增包含hsacirc0004123、hsacirc0001857、hsacirc0001708反向剪切位点的特征片段,利用T-A克隆法构建重组质粒。梯度稀释重组质粒为标准品,应用SYBR荧光染料法建立实时定量PCR(real-time PCR)标准曲线,建立检测circ RNAs的绝对定量PCR方法,并进行方法学评价。应用该法检测193例B-ALL患儿和20例非血液肿瘤对照中circ RNAs(hsacirc0004123、hsacirc0001857、hsacirc0001708)的表达,探索circ RNAs在儿童B-ALL中的诊断和预后价值。结果:成功建立检测circ RNAs荧光定量PCR方法,该法线性范围广,灵敏度、特异性高,重复性好。应用该法对hsacirc0004123、hsacirc0001857、hsacirc0001708及其分别对应的亲本基因表达进行定量。与对照组相比,hsacirc0004123(p=0.0057)、hsacirc0001857(p<0.0001)及其亲本基因ETV6(p=0.038)、PAX5(p<0.0001)在儿童B-ALL中均呈高表达,差异具有统计学意义;hsacirc0001708(p=0.1796)及其亲本基因IKZF1(p=0.7294)在儿童B-ALL中表达均有升高趋势,但无统计学意义。利用受试者工作曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析hsacirc0004123、hsacirc0001857、hsacirc0001708对儿童B-ALL中的诊断价值,发现曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.6937,0.8544,0.5968。提示hsacirc0001857对儿童B-ALL诊断价值较高,hsacirc0004123对儿童B-ALL诊断价值中等,而hsacirc0001708对儿童B-ALL中的诊断价值较弱。以B-ALL中circ RNAs的中位拷贝数作为节点,分析hsacirc0004123、hsacirc0001857、hsacirc0001708及其亲本基因ETV6、PAX5、IKZF1高表达和低表达儿童B-ALL的生存曲线,结果显示,高表达和低表达3种circ RNAs及其亲本基因的生存曲线分析均无统计学意义。相关性分析发现,hsacirc0004123、hsacirc0001857、hsacirc0001708与其各自的亲本基因ETV6、PAX5、IKZF1表达,均呈正相关(R2值分别为0.6357、0.7635、0.8381)。结论:成功建立检测circ RNAs荧光定量PCR法,线性范围广、灵敏度高、特异性好、重复性好,可用于检测患者标本中相应circ RNAs的绝对拷贝数。其中hsacirc0004123和hsacirc0001857对儿童B-ALL具有良好的诊断价值,可用于疾病诊断。
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