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本研究以我国4品种华南型小型猪、1品种华北型小型猪、2品种高原型小型猪以及3群体野猪共10群体311头小型猪为研究对象,运用PCR—SSCP分型技术与测序法对SLA—DOA与—DOB基因外显子3以及SLA—DOB基因上游调控区进行多态分析,初步探讨中国小型猪SLA—DO类基因的群体遗传多样性,为今后进一步进行基因的功能研究提供参考依据。主要结果如下:
1、在Baba(1999)研究的基础上,通过比较基因组的方法对SLA—DOA基因进行多物种同源比对后,重新界定SLA—DOA基因外显子1、2、3区域的氨基酸残基数分别为27(1~27)、83(28~110)、94(111~204)。
2、按照国际动物遗传学会(ISAG)2005年制定的SLAⅡ类基因系统命名法的要求对新等位基因进行了初步的系统命名,建立等位基因系统进化树。本研究共发现2个,SLA—DOA新等位基因,14个SLA—DOB1新等位基因,5个SLA—DOB2新等位基因,9个SLA—DOB—URR新等位基因,序列多样性分析表明SLA—DO类基因多态性很低,但DOB1(π=0.0101)基因多态性远比DOA(π=0.0059)丰富;选择性检验发现DOA与DOB基因在进化过程中所受到的选择是不同的。
3、群体遗传多样性分析表明,在DOA与DOB基因的14个SNPs位点中,有4个位点(DOA—ex3+135;DOB—ex3+133、+160;DOB—URR—278)表现出小型猪与野猪间的差异与品种特异性。
4、对14个SNPs构成的单倍型块分析发现,3个稳定的单倍型块位于DOB—URR—343、—345、—278、—133位点之间,DOB—ex3+38、+52位点之间,DOA—ex3+19、+135。挑选这8个具代表性的SNPs位点,计算出非零单倍型有35种,发现8种主要单倍型块,其中有5种是两次突变才能达到,有3种经一次突变的单倍型基本上缺失了。
5、主单倍型块频率分析发现,“ATGACCGC”在10群体小型猪中频率分布高达73.2~45.3%;“CTAGCCGC”主要分布在5品种小型猪中:五指山猪(21.7%)、云南野猪(21.1%)、巴马小型猪(20.4%)、滇南小耳猪(20.0%)、甘孜藏猪(14.7%)、华南野猪(13.4%);“ATGATTGC”主要分布在东北野猪(13.4%)与华南野猪(14.2%)中,由此可以看出,主单倍型块的分布具有一定的地理分化。