目的多西环素(Doxycycline,DOX)对弥漫性大B细胞淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤具有抗肿瘤作用,我们既往首次报道DOX在体外抗骨髓瘤细胞(multiple myeloma,MM)的作用。目前DOX抗MM的具体机制未完全明确。本研究中我们选用MM细胞株H929,探讨DOX对骨髓瘤细胞ERK及AKT通路影响的相关机制。方法1、用CCK8法检测不同浓度的DOX(分别为0、10、20、40、80mg/L)处理H929细胞1~3天后OD值,计算细胞增殖抑制率。2、用Western Blot法检测5、10mg/L DOX处理H929细胞1~3天后对p-ERK1/2蛋白表达的影响及10mg/L DOX处理H929细胞6小时、1天、2天、3天后对p-Akt、p-MEK蛋白表达的影响。3、用CCK8法检测MEK抑制剂U0126(0、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L)以及ERK1/2抑制剂FR180204(0、2.5、5、7.5、10、15、20μmol/L)处理H929细胞1~3天后OD值,计算细胞增殖抑制率。筛选出合适的抑制剂浓度处理H929细胞。4、用Western Blot法检测5、10μmol/L U0126处理H929细胞1~3天p-Akt、p-ERK1/2的蛋白表达情况。5、用Western Blot法检测10mg/L的U0126处理H929细胞1~3天对Akt下游蛋白p-GSK-3β、p-BAD的影响。结果1、与无处理对照组相比,DOX处理组H929细胞的增殖受到抑制。且在相同时间下,随着DOX浓度的增加增殖抑制率逐渐升高;在相同处理浓度下,随着时间的延长增殖抑制率也逐渐升高。2、5mg/L DOX处理H929细胞2、3天及10mg/L DOX处理1~3天后,p-ERK1/2的表达下调,p-Akt(thr308和ser473)的表达均上调,而p-MEK的表达无明显变化。3、U0126(0、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L)及FR180204(0、2.5、5、7.5、10、15、20μmol/L)分别处理H929细胞1~3天后,与无药物处理组相比H929细胞的增殖均受到抑制。在相同时间下,随着U0126、FR180204浓度的增加增值抑制率逐渐升高。4、5、10μmol/L U0126处理处理H929细胞1~3天后,p-ERK1/2的表达下调,而p-Akt(thr308)的表达无显著变化。5、10mg/L的U0126处理H929细胞1天、2天,p-GSK-3β、p-BAD的表达上调。结论1、DOX能抑制H929细胞的增殖,并呈时间剂量依赖关系。2、DOX抑制MM细胞的作用可能部分通过直接抑制ERK的磷酸化激活来介导的。3、在DOX处理H929过程中,对ERK磷酸化的抑制并非主要通过MEK来介导的。4、DOX对H929细胞ERK通路的抑制,与PI3K/AKT通路的的激活没有明确的因果关系。