论文部分内容阅读
目的:探讨藏药四味黄芪散对低压低氧诱导大鼠海马神经元自噬作用的影响。方法:72只雄性SD大鼠,分常氧对照组、低氧损伤组和低氧药物组三组,并根据暴露低压低氧时间段不同每组又分为第3,7,15,30天组。将低氧损伤组和低氧药物组大鼠置于5000m的低压氧舱。常氧对照组、低氧损伤组的大鼠每天灌胃1 mL 0.9%生理盐水,低氧药物组的大鼠每天灌胃1 mL藏药四味黄芪散水提取液。在各时间点上采集样本。用Elisa方法检测血清中HIF-1α水平;透射电镜观察每组海马神经元自噬体的特征;免疫荧光标记每组海马神经元LC3水平;尼氏染色观察每组海马神经元病理形态学的变化;Western blot方法检测LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、PKCε、BDNF的蛋白水平。结果:(1)与常氧对照组比较,低氧损伤组,第3、7天,血清HIF-1α水平显著升高(p<0.05);随着时间延长海马神经元损伤加重,PKCε、BDNF蛋白水平显著降低(p<0.05);海马神经元自噬体数量增多,LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平显著升高(p<0.05),p62蛋白水平显著降低(p<0.05)。第15、30天,血清HIF-1α水平没有显著变化(p>0.05);海马神经元损伤加重,PKCε、BDNF蛋白水平显著升高(p<0.05);第15天,海马神经元LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平显著降低(p<0.05),p62蛋白水平显著升高(p<0.05);第30天,海马神经元LC3Ⅱ/Ⅰ、p62蛋白水平没有显著变化(p>0.05)。(2)用藏药四味黄芪散水剂干预后,与低氧损伤组比较,低氧药物组,第3、7天,血清HIF-1α水平显著降低(p<0.05);海马神经元损伤程度减轻,PKCε、BDNF蛋白水平显著升高(p<0.05);海马神经元自噬体数量减少,LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平显著降低(p<0.05),p62蛋白水平显著升高(p<0.05)。第15、30天,血清HIF-1α水平没有显著变化(p>0.05);海马神经元损伤减轻,PKCε蛋白水平显著降低(p<0.05),BDNF蛋白水平显著升高(p<0.05);第15天,海马神经元LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平显著升高(p<0.05),p62蛋白水平显著降低(p<0.05);第30天,海马神经元LC3Ⅱ/Ⅰ、p62蛋白水平没有显著变化(p>0.05)。(3)相关性分析,低氧损伤组中,海马神经元PKCε与BDNF蛋白水平变化呈正相关(r=0.976,p<0.01);第3、7天低氧损伤组、低氧药物组,海马神经元PKCε、BDNF与LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平变化呈负相关(r=-0.981,p<0.05;r=-0.899,p<0.05,n=6)。结论:1.急性低压低氧诱导大鼠海马神经元自噬体的形成以及自噬蛋白的过表达,PKCε、BDNF蛋白表达水平降低,损伤了海马神经元。2.藏药四味黄芪散干预后,海马神经元细胞自噬活动减轻,PKCε、BDNF蛋白水平上调,海马神经元的损伤减轻。