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目的:烧烫伤是一种常见的皮肤创伤,对患者的身体和心理均造成损害。我们前期研究发现人脐带来源间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSCs)及其分泌的外泌体(human umbilical cord mesenchymal stem cell derived exosomes,hucMSC-Ex)能够促进皮肤伤口愈合,具体机制尚不十分清楚。本研究旨在探讨血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)在hucMSC-Ex促进血管生成修复皮肤深Ⅱ度烫伤中的作用,构建具有更加显著的皮肤损伤修复功能的Ang-2修饰hucMSC-Ex。方法:(1)贴壁法分离培养hucMSCs,ExoQuick-TCTM沉淀法提取hucMSC-Ex,通过透射电子显微镜(TEM)和纳米颗粒示踪分析仪(NTA)观察hucMSC-Ex的形态和粒径,Western blot检测Ang-2蛋白及外泌体表面标志蛋白CD9、CD63、CD81的表达。(2)人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)与hucMSC-Ex共培养,通过Western blot、实时荧光定量PCR和细胞免疫荧光检测hucMSC-Ex处理后HUVECs中CD63和Ang-2的表达,观察hucMSC-Ex在HUVECs中的分布及对Ang-2表达的调控作用。通过CCK8、transwell和管形成实验观察hucMSC-Ex对HUVECs增殖、迁移和管形成能力的促进作用。(3)采用重组慢病毒转染构建过表达或敲减Ang-2的hucMSC-Ex(ExAng-2或ExshAng-2)并通过Western blot进行验证,观察ExAng-2或ExshAng-2对HUVECs的Ang-2表达及对HUVECs增殖、迁移和管形成能力的调控作用。(4)80℃热水烫伤8s的时间构建SD大鼠皮肤深Ⅱ度烫伤模型,注射hucMSC-Ex、ExAng-2或ExshAng-2进行治疗,通过观察创面大体观、HE染色和CD31的组织免疫化学染色来评估其修复效果。结果:(1)提取的hucMSC-Ex具有外泌体的典型表征,且表达Ang-2蛋白。HucMSC-Ex处理可提高HUVECs的Ang-2蛋白表达水平,促进HUVECs的增殖、迁移和管形成。(2)成功构建ExAng-2或ExshAng-2,Ang-2过表达进一步增强了hucMSC-Ex的促HUVECs迁移和管形成能力,而敲减Ang-2后hucMSC-Ex的促HUVECs迁移和管形成能力减弱。(3)在大鼠皮肤深II度烫伤模型中,hucMSC-Ex可以促进损伤皮肤CD31阳性血管的生成,加速创面愈合、表皮和皮下附属腺结构的再生。与hucMSC-Ex相比,ExAng-2具有更加显著的促血管生成作用,加快创面愈合、表皮和皮下附属腺结构再生的能力更强。而ExshAng-2的促血管生成作用减弱,加快创面愈合、表皮和皮下附属腺结构再生的能力降低。结论:Ang-2是hucMSC-Ex促血管生成修复皮肤损伤的关键活性分子,Ang-2修饰的hucMSC-Ex具有更加显著的促血管生成和皮肤损伤修复功能。