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干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)是一种具有广泛抗病毒、抗细胞内寄生菌及胞内寄生虫、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子，在机体免疫系统中发挥重要作用。它主要由活化的T淋巴细胞和NK细胞产生，丝裂原以及抗原特异性刺激T淋巴细胞克隆也可产生。研究表明，IFN-γ在治疗病毒性疾病和作为疫苗佐剂方面具有良好的应用前景，有望成为新一代的疫苗佐剂。为了研究和开发猪IFN-γ并用于相关疾病的治疗或预防，我们进行了猪干扰素-γ基因的克隆，表达及其疫苗佐剂效应研究。以植物血凝素(PHA)和脂多糖(LPS)共同刺激分离的猪外周血淋巴细胞，提取总RNA，采用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增猪IFN-γ基因，将扩增到的基因与pGEM-T-easy载体连接后进行酶切、PCR以及测序鉴定，结果表明：所克隆的猪IFN-γ基因与GeneBank中的猪IFN-γ基因序列完全一致。依照该基因开放阅读框(ORF)两侧序列重新设计并合成引物，以重组质粒pGEM-T-easy／IFN-γ为模板进行扩增，扩增产物和pGEX-4T-1质粒分别用EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后连接，转化大肠杆菌。经酶切、PCR以及测序鉴定证明，猪IFN-γ基因正确插入到pGEX-4T-1载体。用ITPG诱导表达，表达产物通过SDS-PAGE和Western-blot分析，证实猪IFN-γ基因在大肠杆菌中得到了成功表达，目的蛋白与GST形成融合形式，分子量大小为40KD左右，与预期的大小相吻合，而且可被鼠抗人重组IFN-γ血清所识别；薄层扫描分析表明，表达产物约占菌体总蛋白的30-50％。将克隆到的猪IFN-γ基因插入到哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1真核启动子CMV下，直接用该质粒作为猪囊虫全虫疫苗佐剂免疫小鼠，检测抗体，结果试验组小鼠抗体滴度明显高于各对照组，说明猪IFN-γ基因重组真核表达载体pcDNA3.1对猪囊虫全虫疫苗有良好的免疫佐剂作用，优于传统使用的铝盐和206佐剂。该研究首次对IFN-γ在防制猪囊虫病方面的作用进行了探索，为打破目前寄生虫免疫防制的被动局面进行了有益的尝试。