猕猴桃作为雌雄异株的显花植物,对其生长早期进行性别鉴定具有重要的现实意义。首先,猕猴桃作为经济作物以收获果实为主要盈利,雄性植株种植应少于雌性植株;其次,猕猴桃从播种到多产的成熟期经历时间较长,需要3～5年,童期漫长,而且幼苗期雌雄植株形态相似,难以准确有效地进行形态学性别鉴定,这造成了猕猴桃改良和选育的艰难困境。因此,开发用于猕猴桃早期性别鉴定的生物技术或分子标记可以有效的控制栽培过程中的雌雄比例,节省人力物力,提高育种效率,创造更大的经济价值。文章通过开发毛花猕猴桃性别相关的SSR分子标记,以期能在早期鉴定出毛花猕猴桃雌雄植株,提高毛花猕猴桃资源利用率。利用MISA工具从毛花猕猴桃基因组的29条染色体和一条未匹配序列中筛选获得381 250个SSR位点,并对SSR位点的数量与分布特征及碱基的重复类型和重复次数进行统计分析。设计合成265对引物,利用毛花猕猴桃基因组DNA作为模板,采用普通PCR扩增的方法以及聚丙烯酰胺凝胶电泳分离检测方法筛选出具有性别差异扩增片段的SSR引物。其中序号为Primer000181的引物表现为雄性特异,序号为Primer000081的引物能够在雌性植株和雄性植株中扩增出性别特异的不同大小的基因片段。将这两对引物在毛花猕猴桃5个雄株、2个雌株样本中进行验证,其表现均与前文一致。将与预测结果不符的部分特异性片段进行测序比对,搜索其同源基因,绘制系统进化树,以获取更多SSR位点相关等位基因的信息。同时,使用在中华猕猴桃和山梨猕猴桃复合体群体筛选验证的3对用于性别鉴定的SSR分子标记在猕猴桃种间进行通用性验证,以期能够扩大猕猴桃性别鉴定分子标记的使用范围。本研究印证了利用毛花猕猴桃基因组开发性别鉴定相关SSR分子标记的可行性,并筛选出2对可以鉴定毛花猕猴桃雌雄植株的引物,能够在毛花猕猴桃生长早期可靠、快速的鉴定其性别,如果需要投入使用,还需进一步扩大测试群体,验证鉴定的准确性。通过比对测序实际扩增的特异性片段和预测结果,分析其差异,合理猜测偏差原因。通过基因系统进化树的分析,分析猕猴桃种间的同源基因的进化关系和遗传距离。中华猕猴桃和山梨猕猴桃复合体群体验证的3对用于性别鉴定的SSR分子标记在本研究所试猕猴桃品种间并没有扩增出如之前所报道的性别特异性片段。因此,这3对SSR标记无法在这些猕猴桃品种间进行使用,说明用于猕猴桃属植物通用的性别鉴定的分子标记还需后人进一步筛选验证。