涡旋磁热诱导的乳腺癌免疫原性死亡研究

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目前,免疫疗法在非小细胞肺癌,乳腺癌等治疗中取得了一些重要突破,特别是治疗性肿瘤疫苗,如sipuleucel-T(Provenge?)经FDA于2010年批准,用于转移性去势抵抗性前列腺癌的治疗,DCVax?-Brain,M-Vax TM,Hybri Cell,CIMAVax EGF?和Oncophage?等多种治疗性肿瘤疫苗先后获批。但是,包括治疗性肿瘤疫苗在内的多种免疫疗法的疗效仍有待提高,其中的主要原因是疫苗诱导的抗肿瘤免疫反应低。如何诱导癌细胞的免疫原性细胞死亡(ICD)是解决免疫治疗疗效的关键。近年来,基于磁性纳米粒子(MNPs)在外交变磁场(AMF)下的感应热效应的磁热疗法(MTT)逐渐成为恶性肿瘤的一种新的治疗手段。MTT具有穿透深层组织,肿瘤选择性高,靶向性强,特异的杀伤肿瘤等特点。虽然关于MTT免疫学效应已有报道,但磁热疗是否会引起的免疫原性细胞死亡尚无系统的论证。本论文以一种具有高比吸收率(SAR)的高效涡旋磁氧化铁纳米环(FVIOs)为热疗剂,系统地对磁热疗是否会诱导的免疫原性细胞死亡效应进行验证,并希望通过疫苗接种实验考察同源小鼠的免疫响应。具体研究结果如下:1.涡旋磁氧化铁纳米环(FVIOs)为热疗剂的合成。采用水热法合成出了70 nm涡旋磁氧化铁纳米环。利用XRD,TEM,FT-IR等一系列方式进行表征,证明该材料的成分为Fe3O4,呈中空的环形,大小均一,水溶性良好。2.涡旋磁氧化铁纳米环(FVIOs)热疗剂的诱导细胞免疫原性死亡验证。利用细胞毒性检测,在保证热疗剂安全剂量内,通过施加特定交变磁场,考察了MTT诱导的细胞免疫原性死亡,结果显示:无论是鼠源乳腺癌细胞系4T1还是人源乳腺癌细胞系MDA-MB-231,在75μg/m L的纳米环与细胞共孵育10 min后,细胞的存活率均不足40%。通过4组实验,即对照组,奥沙利铂组,磁热疗组和传统水浴组(43℃处理2 h),选取了12个指标进行细胞层面的DAMPs信号分子验证。结果表明,经过磁热处理后,除TLR3后,所有指标都发生明显的变化,而传统的水浴组只有热相关的2个指标(HSP70,HSP90)发生变化,说明MTT能够有效诱导肿瘤细胞免疫原性死亡。3.磁热疗引发免疫原性细胞死亡的体内免疫组化及肿瘤疫苗验证。构建小鼠乳腺癌模型。对Balb/c小鼠用4T1细胞系构建小鼠乳腺癌皮下瘤模型,在进行磁热治疗结束后,收集肿瘤进行免疫组化验证,结果表明磁热疗可以在组织层面诱导免疫原性细胞死亡。同时进行了治疗实验,结果表明,在4T1小鼠乳腺癌皮下瘤模型中,肿瘤的生长速度明显降低,而在MDA-MB-231小鼠乳腺癌皮下瘤模型中并未发现类似的结果,表明磁热疗可以引发免疫原性细胞死亡。在免疫原性细胞死亡的金标准-疫苗实验中,同样得出类似的结论。
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