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目的:研究HINT1在胃癌病例中的表达方式,并结合临床病理资料分析其临床意义;初步探讨胃癌中HINT1表达的可能表观遗传机制。方法:以实时荧光定量聚合酶链反应( Real-time Fluorescent Quantitative Poly- merase Chain Reaction, q-PCR )的方法分析34例胃癌中及其对应非肿瘤组织中Hint1的表达水平,对肿瘤组、非肿瘤组中的基因表达量进行统计学分析;结合临床病理信息,统计学分析基因相对表达水平与临床病理特征之间的相关性;同时应用RT-PCR的方法检测胃癌中及其对应非肿瘤组中Hp以及EB病毒的感染情况,并对其分组进行统计学分析Hint1在感染组与非感染组之间的基因相对表达水平。应用蛋白免疫印记Western blot方法检测51例胃癌及其对应非肿瘤组织中HINT1蛋白水平的表达;结合临床病理信息,统计学分析基因相对表达水平与临床病理特征之间的相关性;对胃癌中及其对应非肿瘤组中Hp以及EB病毒的感染情况进行分组及统计学分析HINT1在感染组与非感染组之间的基因相对表达水平。免疫组织化学方法分别检测5例低分化、5例中分化胃癌及对应非肿瘤组织石蜡组织切片中HINT1蛋白水平的表达,分析分化程度与基因表达之间的相关性。在胃癌及正常胃黏膜细胞系用RT-PCR和Western blot的方法检测HINT1的表达,并用表观遗传药物DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂胞苷( 5–Azacytidine, 5–Aza - dC )处理低表达胃癌细胞,检测其蛋白和mRNA水平表达恢复情况。应用甲基化特异性PCR ( Methylation Specific PCR, MSP )技术检测胃癌及其对应非肿瘤组织Hint1启动子区甲基化状态。结果:在34例胃癌病例中,Hint1在肿瘤组的表达明显低于非肿瘤组织( p = 0.03 ),与相应非肿瘤组织相比有58.82%的肿瘤组织表现出Hint1低表达。在Hp感染组中,Hint1在肿瘤中表达明显低于非肿瘤组织( p = 0.039 );而非感染组未见明显差异;在EB非感染组中,Hint1在肿瘤中表达明显低于非肿瘤组织( p = 0.001 );而感染组未见明显差异。在Western blot方法检测51例胃癌病例中,与相应非肿瘤组织相比有39.22%的肿瘤组织表现出HINT1低表达,且低分化组中表达明显低于中高分化组( p = 0.027 )。Hp、EB至少感染一项的情况下,HINT1在肿瘤组织中的低表达趋势更明显( p = 0.005 )。10例胃癌及对应非肿瘤组织石蜡切片免疫组织化学方法定位检测发现,HINT1表达于胞浆和胞核,在相应非肿瘤组织均表现阳性表达的情况下,4/5的低分化肿瘤组织表现为低表达,4/5的中分化肿瘤组织表现为阳性表达。与Western blot结果趋势一致。对低表达胃癌细胞系AGS加5-Aza-dC处理72 h,发现细胞mRNA水平和蛋白水平HINT1的表达均有明显恢复,且有一定浓度依赖性。典型病例的研究发现Western blot示HINT1在肿瘤组织中表达受抑制的病例中,其对应MSP结果示肿瘤组织中Hint1启动子区为甲基化状态,而相邻非肿瘤组织为未甲基化状态。结论:本研究得出以下结论:1、在mRNA水平,Hint1在胃癌中呈低表达模式;结合Hp与EB感染情况分析,Hint1在Hp感染组及EB非感染组胃癌中也呈低表达模式。2、在蛋白水平,HINT1在胃癌中表现低表达模式,其低表达在低分化组中更为明显,且受Hp、EB感染影响。3、对低表达胃癌细胞系的研究发现Hint1低表达与DNA甲基化可能相关。4、胃癌病例MSP分析初步表明Hint1低表达与启动子区甲基化有一定相关性。