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目的:通过增强和抑制Survivin基因在K562细胞中的表达,探讨Survivin基因的表达对淋巴细胞增殖和功能的影响,为进一步研究白血病发生发展机制及免疫基因治疗奠定实验基础。方法:①采取脂质体介导的方法,将重组质粒pEGFP–C1–survivin转染K562细胞,增强K562细胞中survivin基因的表达,并应用G418筛选纯化(K562/survivin+细胞)。②采取脂质体介导的方法,将靶向survivin基因的RNAi重组质粒pTZU6+1–survivin转染K562细胞,干扰K562细胞中survivin基因的表达(K562/survivin-细胞)。③应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测K562/survivin+细胞、K562细胞和K562/survivin-细胞3种细胞中Survivin mRNA的水平。④采取密度梯度离心法分离健康人外周血中的单个核细胞(PBMC)。⑤将肿瘤细胞和PBMC混合培养,实验分为三组:K562/survivin+组;K562组;K562/survivin-组。通过MTT法、流式细胞术和ELISA方法分别检测混合培养体系中淋巴细胞增殖能力、NK细胞活性和IFN-γ水平来反映survivin基因对淋巴细胞增殖和功能的影响。结果:①获得高纯度稳定高表达survivin基因的K562/survivin+细胞和低表达survivin基因的K562/survivin-细胞。②K562/survivin+细胞的Survivin PCR产物电泳带较K562细胞明显增强;K562/survivin-细胞的PCR产物电泳带较K562细胞明显减弱。③K562/survivin+组的淋巴细胞增殖指数明显低于K562组,且差异有统计学意义(P<0.05)。K562/survivin-组的淋巴细胞增殖指数与K562组无明显差异(P>0.05)。④NK细胞活性在K562/survivin+组明显低于K562组;在K562/survivin-组明显高于K562组,结果有统计学意义(P<0.05)。⑤混合培养上清中分泌的IFN-γ,K562/survivin+组明显低于K562组; K562/survivin-组明显高于K562组,结果有统计学意义(P<0.05)。结论:①Survivin基因的高表达可以抑制淋巴细胞的增殖。②Survivin基因的高表达可以抑制NK细胞活性;Survivin基因的低表达可以上调NK细胞活性。③Survivin基因的高表达可以抑制淋巴细胞分泌IFN-γ;Survivin基因的低表达可以促进淋巴细胞分泌IFN-γ。④提示Survivin基因可以抑制机体抗肿瘤的免疫功能,帮助肿瘤细胞逃脱机体的免疫控制。