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目的:葡萄膜炎是常见的眼科疾病,是一组可累及葡萄膜、视网膜、视网膜血管及玻璃体的炎性病变,常累及双眼,易于反复发作,是致盲的常见疾病。由于其病因和发病机制复杂不清,目前尚无理想的治疗方法。近年来,随着分子生物学和免疫学的发展,人们日益认识到葡萄膜炎是一种器官特异性自身免疫病,越来越多的研究证实免疫学机制在其发病中占到重要作用。一般认为,多种葡萄膜炎被认为是针对特定眼部蛋白的抗原特异性T细胞介导的自身免疫反应,其中T细胞在葡萄膜炎发病中可能起到中心作用。多种细胞因子如IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-1、TGF-β、趋化因子及其受体等也参与了葡萄膜炎的发病。但目前关于其具体发病机制研究还不是很清楚,进一步研究其免疫学发病机理并探讨新的免疫学治疗方法对于葡萄膜炎有重要意义。CD4+CD25+调节性T细胞是调节性T细胞的亚群之一,可通过抑制自身反应性T细胞的免疫反应、抑制传统T细胞的活化以及促进一些抑制性细胞因子的分泌等,在维持机自身免疫性疾病的发生中发挥重要作用。目前CD4+CD25+调节T细胞在葡萄膜炎中表达及作用的研究主要集中在在实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(EAU)动物模型中。多项研究表明,CD4+CD25+调节T细胞在EAU中发挥重要作用,过继转移这种细胞给EAU小鼠能起到治疗作用,为葡萄膜炎的治疗提供了一种新的思路。但是,目前有关CD4+CD25+细胞在葡萄膜炎患者中的表达及其作用研究较少。因此,我们实验旨在:1.通过检测不同病情程度葡萄膜炎患者外周血中CD4+CD25high Treg细胞的表达水平,初步探讨CD4+CD25high Treg细胞在葡萄膜炎发病中的作用;2.通过同时检测CD4+细胞胞内IFN-γ、TNF-α及IL-10细胞因子及其单个核细胞培养上清中细胞因子的表达,并分析其表达与CD4+CD25high调节T细胞表达的相关关系,进一步研究葡萄膜炎免疫学发病机理,并初步探讨CD4+CD25high Treg细胞在葡萄膜炎的发病中可能起到调节作用的机理。方法:1.选取正常健康对照16例及病情活动期葡萄膜炎患者30例,按照不同分类将其总结,并记录血沉等炎症指标,按照评分标准将病情评分。2.用三色免疫荧光染色方法、流式细胞术分析,对葡萄膜炎患者及对照外周血细胞表面CD4、CD25、及CTLA-4的表达进行检测,分析CD4+CD25hig在CD4+中表达比例及其CD4+CD25high CTLA-4+细胞的表达。而且,将其与不同类型、不同病情严重程度患者进行相关分析。3.用细胞内免疫荧光染色、流式细胞术方法,检测CD4+细胞内胞内因子IFN-γ、TNF-α及IL-10的表达,分析其相互之间、与病情严重程度及与细胞表面CD4+CD25high表达的相关性。并采用ELISA方法,检测葡萄膜炎患者外周血单个核细胞培养上清中IFN-γ、TNF-α及IL-10的表达,分析其与病情严重程度及其细胞表面CD4+CD25high表达的相关性。结果:1.葡萄膜炎患者外周血中CD4+CD25high T细胞的百分率与正常健康对照(8.56±4.22% vs.5.72±3.11%)相比,显著升高(P= 0.022),而且与患者病情严重程度明显正相关(P=0.007)。但不同类型葡萄膜炎患者之间表达无明显差异(P>0.05)。另外,CD4+ CD25highCTLA4+ T细胞在葡萄膜炎患者外周血中比例较正常对照明显升高(P=0.012)。2.葡萄膜炎患者外周血中IFN-γ在CD4+ T细胞中的表达阳性百分率为7.02±4.86%,与正常健康对照(4.19±3.38%)相比显著升高(P=0.026)。葡萄膜炎患者外周血中TNF-α+细胞在CD4+ T细胞中的表达阳性百分率为10.22±5.61%,较正常健康对照(6.75±4.18%)显著升高(P=0.023)。IL-10+在葡萄膜炎患者CD4+细胞内表达比例较正常健康对照略高,但统计上无显著性差异。3.这三种胞内细胞因子在CD4+细胞内的表达与患者病情严重程度均有显著相关性(P<0.05),而且相互之间均明显相关(P <0.05)。同时发现TNF-α、IL-10分别与CD4+CD25high在外周血的表达均有明显相关性(P<0.05)。4. ELISA方法发现葡萄膜炎患者外周血淋巴细胞分泌上清中IFN-γ、TNF-α的表达与正常健康对照相比均明显升高(P<0.05),且与病情明显有相关性(P<0.05)。IL-10虽在葡萄膜炎患者外周血单个核细胞培养上清中表达水平较健康对照略高,但无统计学差异(P>0.05)。结论:1.实验发现:葡萄膜炎患者外周血中CD4+CD25high的比例显著高于健康对照组,同时,与Treg细胞密切相关的CTLA-4同样被发现在葡萄膜炎患者CD4+CD25high Treg细胞中高表达,初步提示CD4+CD25+ Treg可能在葡萄膜炎的发病过程中发挥重要作用,并与疾病的活动密切相关。2.建立细胞内胞内因子表达检测体系,证实在葡萄膜炎患者外周血CD4+细胞中细胞因子IFN-γ、TNF-α表达较正常健康对照升高,可能作为重要的致炎因子参与葡萄膜炎发病。葡萄膜炎患者外周血CD4+细胞内TNF-α和IL-10的表达与CD4+CD25+调节T细胞表达有一定相关性,也初步提示这些细胞因子与CD4+CD25high的关系,可能受其调控。3.上述实验体系的建立,为我们的进一步深入研究葡萄膜炎中CD4+CD25+调节T细胞的具体作用机理提供了很好的保障,其结果为进一步揭示葡萄膜炎的免疫学发病机理,并且进一步探讨葡萄膜炎新的免疫学治疗方法提供了线索。