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本试验以青农灰鹅(肥肝型)为研究对象,根据鹅A-FABPmRNA序列(AF472610)和鸡A-FABP基因组序列(AY675941)设计1对引物,扩增鹅A-FABP基因内含子Ⅰ序列。选取200只,体重相似的12周龄健康青农灰鹅进行填饲。分别在填饲0d、6d、12d、18d、24d、30d,选取15只试验鹅进行屠宰、取样与测定;应用PCR-SSCP技术测定基因多态性;采用乙醚浸提法和气相色谱法测定肝脏中脂肪和脂肪酸含量;利用实时荧光定量PCR技术测定A-FABP与MSTN基因在不同填饲日龄鹅肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸肌、腿肌和腹脂中的表达量;用SPSS17.0软件对不同基因型与屠宰、肥肝性状的相关性,两基因表达量的相关性以及两基因表达量与肥肝性状的相关性进行分析。结果显示:
1鹅A-FABP基因内含子Ⅰ序列长为1473bp(登录号:GenBankaccessionHQ833815),与其它12个物种序列比较,发现其与鸭的同源性达到94.42%,与鸡的同源性为81.82%。经SNPs检测发现,P2和P3扩增产物存在变异位点。遗传多态性分析,A、B两个等位基因的基因频率分别为0.597和0.403,多态信息含量(PIC)是0.365,基因型分布未偏离Hardy-Weinberg平衡状态(x2=0.020,P>0.05);D、E两个等位基因的基因频率分别为0.483和0.517,PIC是0.375,基因型分布偏离Hardy-Weinberg平衡状态(x2=6.782,0.01<P<0.05)。表明,鹅A-FABP基因内含子Ⅰ序列遗传变异处于中度多态,P2扩增产物的基因型分布处于Hardy-Weinberg平衡状态,P3扩增产物的基因型分布偏离Hardy-Weinberg平衡状态。
2填饲0d、6d、18d、24d、30d,肥肝鹅的活重、屠体重、胸肌重、腿肌重、腹脂重、全净膛重和半净膛重基因型为AB型>AA型>BB型;填饲12d,以上屠宰性状基因型为AA型>AB型>BB型。填饲0d,腿肌重AB型与BB型差异显著(P<0.05)。填饲6d,全净膛重AB型与AA型差异显著(P<0.05)。填饲12d,活重AA型与BB型差异显著(P<0.05);屠体重AA型与AB、BB型差异显著(P<0.05)。填饲18d,腿肌重AB型与BB型差异显著(P<0.05)。填饲24d,活重AB型与BB型差异显著(P<0.05);屠体重AB型与AA、BB型差异显著(P<0.05);腿肌重AB型与BB型差异显著(P<0.05);全净膛重AB型与AA、BB型差异显著(P<0.05);半净膛重AB型与AA、BB型差异显著(P<0.05)。填饲30d,腹脂重AB型与AA型差异显著(P<0.05)。表明,A-FABP基因引物P2位点A等位基因与活重、屠体重、胸肌重、腿肌重、腹脂重、全净膛重和半净膛重这些屠宰性状指标呈正相关。
填饲0d的总不饱和脂肪酸含量;填饲12d的肥肝重;填饲24d和30d,肝内脂肪含量基因型均为AA型>AB型>BB型。填饲0d的肥肝重、肝内脂肪、总饱和脂肪酸含量;填饲6d和18d的肥肝重、肝内脂肪、总不饱和脂肪酸及总饱和脂肪酸含量;填饲12d的肝内脂肪、总不饱和脂肪酸及总饱和脂肪酸含量;填饲24d和30d的肥肝重、总不饱和脂肪酸、总饱和脂肪酸含量基因型为AB型>AA型>BB型。填饲0d,肝内脂肪含量AB型与AA、BB型差异显著(P<0.05)。填饲24d,肝内脂肪含量AA、AB型与BB型差异显著(P<0.05);肥肝重AB型与BB型差异显著(P<0.05)。填饲30d,肝内脂肪含量AA、AB型与BB型差异显著(P<0.05);总不饱和脂肪酸含量AB型与AA、BB型差异显著(P<0.05)。表明,A-FABP基因引物P2位点A等位基因与肥肝重、肝内脂肪、总不饱和脂肪酸及总饱和脂肪酸这些肥肝性状指标呈正相关。
3A-FABP基因在肝脏和腹脂中的表达变化趋势为先升高后下降,分别在填饲24d和12d达到最大值(15.90±0.04、12.72±0.12);腿肌和胸肌中的总体表达规律也为先升高后下降,填饲18d有小幅下降,填饲24d达到最大值,分别为8.88±0.06、6.33±0.13,且肝脏、腹脂、腿肌和胸肌中基因表达量的最大值与其它填饲日龄差异均极显著(P<0.01)。MSTN基因在腿肌和胸肌中的表达规律为先升高后下降,均在填饲18d达到最大值(5.79±0.14、3.67±0.14),且与其它填饲阶段差异极显著(P<0.01)。鹅肝脏组织中A-FABP基因表达量与肝重、肝内脂肪、总不饱和脂肪酸及总饱和脂肪酸含量呈正相关,相关系数分别为0.576、0.510、0.463、0.501,差异均极显著(P<0.01);MSTN基因表达量与肝重、肝内脂肪、不饱和脂肪酸及总饱和脂肪酸含量差异不显著(P>0.05)。表明,A-FABP与MSTN基因在肝用型鹅组织中的表达并多呈负相关,且各自在不同填饲阶段、不同组织中的表达规律具有一定差异性;肝脏中A-FABP基因对肥肝性状的调控起一定作用。