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第一部分:ApoE/SRA/CD36三敲小鼠慢性炎症模型的建立目的:采用酪蛋白刺激ApoE/SRA/CD36三敲小鼠建立炎症模型,模拟人体内低丰度慢性系统性炎症,并进行体内实验,探讨炎症状态下,脂质代谢的变化和组织损害及其分子机制。方法:16只雄性ApoE/SRA/CD36三敲小鼠随机分为两组:对照组(n=8)和炎症组(n=8)。两组小鼠均喂食西方饮食(Western diet, TD88137,含21%脂肪和0.15%胆固醇)。对照组小鼠皮下注射0.5ml PBS,炎症组小鼠皮下注射相同量的酪蛋白,隔天注射一次,持续14周后,处死小鼠,收集血浆、肝脏、肾脏和主动脉组织。血浆离心去血清,检测其中炎症介质—小鼠血清淀粉样蛋白(serum amyloid A,SAA)和IL-6—的水平。结果:与对照组小鼠相比,炎症组小鼠体内SAA和IL-6水平明显升高,分别为26.60±3.24ng/ml vs 14.35±1.73ng/ml(P<0.01),36.37±2.20pg/ml vs 18.02±4.87 pg/ml(P<0.01),差异有统计学意义。结论:隔天小鼠皮下注射10%酪蛋白,持续14周,小鼠体内产生低丰度慢性系统性炎症,炎症模型建立成功。第二部分:炎症致脂代谢紊乱及组织损害相关指标变化目的:研究低丰度慢性系统性炎症状态下,ApoE/SRA/CD36三敲小鼠血清、肝脏、肾脏和主动脉脂质水平的变化,以及肝脏纤维化相关指标的水平,观察炎症致脂代谢紊乱和组织损害的程度。方法:用试剂盒法测定血清脂质水平,包括总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。一部分肝脏、肾脏和主动脉组织包埋于OCT胶制作冰冻切片,一部分肝脏和肾脏组织经脱水、透明、浸蜡、包埋制成石蜡切片。用油红O法染色冰冻切片观察肝脏、肾脏和主动脉脂质沉积的情况;用酶法测定肝脏和肾脏组织中胆固醇的含量;测量并计算主动脉根部斑块总面积与血管周长的比例。用免疫组织化学染色法和Real Time PCR方法检测小鼠肝脏和肾脏组织中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(Fn)蛋白和mRNA的表达。结果:①在脂代谢紊乱方面,血清脂质检测表明炎症组小鼠血清中TC、LDL和HDL水平降低,明显低于对照组小鼠,差异有统计学意义(P<0.05);油红O染色结果显示,炎症组小鼠肝脏、肾脏和主动脉斑块内有大量的红染颗粒,脂质沉积异常增多;细胞内胆固醇测定结果显示,相对于对照组,炎症组小鼠肝脏和肾脏组织中胆固醇含量显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);统计主动脉根部斑块面积与血管周长比例的数据表明,炎症组小鼠斑块面积和脂质含量都明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。②组织损害方面,HE染色显示肝脏和肾脏组织结构有病变;免疫组织化学染色观察炎症组小鼠肝脏和肾脏Col-Ⅰ、Col-Ⅳ、Fn蛋白表达与对照组相比,没有明显增多,但Real Time PCR测定表明炎症组小鼠肝脏Col-Ⅰ、Col-Ⅳ、Fn mRNA的表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:低丰度慢性系统性炎症造成ApoE/SRA/CD36三敲小鼠体内脂质代谢紊乱,炎症组小鼠血脂水平降低,而肝脏、肾脏和主动脉脂质沉积加重,胆固醇在体内重新分布;炎症导致肝脏和肾脏组织损伤,可能启动了肝脏和肾脏纤维化病变。第三部分:炎症对通过LDLr途径致胆固醇在体内重新分布和组织损伤的分子机制目的:通过对低密度脂蛋白受体(LDL receptor, LDLr)途径中核转录因子胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)裂解激活蛋白(SCAP)、SREBP-2和LDLr蛋白和mRNA表达的检测,探究炎症致ApoE/SRA/CD36三敲小鼠体内胆固醇重新分布和组织损伤的分子机制。方法:用Real Time-PCR法和Western Blot法分别检测肝脏和肾脏SCAP、SREBP-2及其下游基因LDLr mRNA和蛋白的表达水平。结果:Real Time-PCR检测表明,与对照组小鼠相比,炎症组小鼠脂代谢相关基因LDLr、SREBP2和SCAP mRNA的表达分别增高了4.56倍、14.72倍、3.14倍,差异有统计学意义;Western Blot、免疫组化染色显示以上基因的蛋白质表达水平显著增加,与基因结果相符。结论:证实了低丰度慢性系统性炎症上调LDLr、SREBP2和SCAP基因表达,并增加蛋白质的表达,使肝脏、肾脏和主动脉组织细胞通过LDLr途径从血清中摄入大量的胆固醇,致胆固醇在体内重新分布,这一过程还可能启动了肝脏和肾脏的纤维化过程,形成早期纤维化。