虹鳟(Oncorhynchus mykiss)染色体显带技术研究

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虹鳟(Oncorhynchus mykiss)是世界上养殖范围最广的名贵鱼类。为了更好地认识.虹鳟的染色体特征,丰富冷水性鱼类的细胞遗传学内容,为其遗传、变异、分类、系统演化以及杂交育种提供科学依据,本文对虹鳟染色体多重显带技术进行了详细的研究。采用肾细胞体内培养法或淋巴细胞培养法制备虹鳟的染色体。对其肾细胞染色体数目统计分析表明,虹鳟染色体组有60条染色体,核型公式为2n=34m+10sm+16t,染色体总臂数(NF)为104。最长染色体的相对长度为6.03,最短染色体的相对长度为2.15,长度比为2.80。采用流式细胞分析仪,测定了虹鳟的DNA含量,与鸡血细胞标.准对照相比为1.59±0.23,以鸡红细胞DNA含量2.3pg.N-1计,则虹鳟体细胞绝对DNA含量为3.65pg.N-1。与鲑形目其他科的四倍体鱼类比较,虹鳟的染色体数目和DNA含量具有相似性,体现出四倍体特征。经过C显带处理,虹鳟染色体除呈现传统的着丝粒区、近着丝粒粒区、中间区和末端区外,还发现某些染色体全部出现C带及部分染色体出现可变带。在分析比较虹鳟不同的染色体C带中期相时,发现有些部位的C带会出现显色的改变,有时呈阴性带,有时呈阳性带。同源染色体的C带的大小、位置及着色强度基本相同,不同染色体的C带有一定差异。中部着丝点染色体均在着丝粒部位处深染。虹鳟的染色体C带类型多为着丝粒C带,多数染色体的着丝点区均显示出一个深浅不同的C带。用修改的G显带技术,进行GTG带纹的显示,虹鳟鱼每条染色体上都能清晰的显出G带,G阳性带对应于AT含量丰富的区域,可见虹鳟染色体上AT序列比较密集,经G显带技术处理后,87%的染色体区域呈现阳性染色。用银染技术处理后发现虹鳟的NORs位于第1号染色体和第13号染色体的长臂上,数目为4个。在DNA复制的不同时期,复制带随之变化,在DNA复制的不同时期,同一条染色体的形态随着DNA的复制不断变化。染色体的形态是动态变化的。应用荧光原位杂交技术(FISH),将虹鳟生长激素基因准确定位在染色体上。目前检测到生长激素基因位于2对顶端着丝粒类型的染色体上。本实验将杂交信号和染色体同时显示,并且在复染的同时结合染色体分带技术,可以精确的进行基因定位。与经济效益密切相关的QTL基因的FISH定位是我们以后研究的重点。虹鳟染色体被CMA3荧光染色后,用B(蓝色激发光)激发时,发现NORs区呈现明亮的荧光。虹鳟鱼长臂处具有4个大小约相等的Ag-NORs,经CMA3染色,长臂处具有大小相差约3-4倍的4个明亮区,说明虹鳟鱼的Ag-NORs和CMA3明亮区位置一致。应用FISH技术,在虹鳟染色体上定位了5SrDNA和18SrDNA位点。虹鳟染色体上共有4个5S rDNA位点和4个1 8SrDNA位点,其中有2处位点相互重合。生物素CMA3标记的杂交信号与18SrDNA位点完全重合。
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