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热休克蛋白转录因子4(heat shock factor4,HSF4)对晶状体的发育分化起着重要作用。HSF4基因的缺失小鼠会发生白内障,并出现晶状体上皮细胞增殖过快以及晶状体纤维细胞分化异常的表型。在研究中,我们发现Srckinase-associated phosphoprotein2(SKAP2)是HSF4的下游基因,其表达水平在HSF4基因敲除小鼠中显著性下调。进一步对SKAP2在晶状体的发育分化中的功能研究显示SKAP2能够调控细胞骨架actin的重组(actin reorganization)。在晶状体上皮细胞分化的起始阶段,胞浆内的actin细胞骨架会解聚并形成细胞周边actin纤维(cortical actin)。Actin细胞骨架的重组对晶状体上皮细胞的分化与存活都起着关键作用。我们的结果显示,首先,在人晶状体细胞系(SRA01/04)中,SKAP2可以聚集在细胞膜突起的前端,并且与F-actin有相互作用;其次,在人晶状体细胞中过表达SKAP2后能引起细胞浆actin细胞骨架解聚;另外,通过RNA干扰技术将SKAP2基因沉默后能抑制上皮细胞分化过程中actin的重组。同时我们也发现了HSF4缺失小鼠上皮细胞在体外分化过程中actin重组也受到了抑制。
进一步研究发现SKAP2是通过其N端与NCK2的SH2结构域的结合来调控actin重组。SKAP2的N端对actin重组的调控起着非常重要的作用。已有报道指出NCK2是一个连接细胞膜受体与细胞骨架的接头蛋白,从而调控细胞骨架。我们的结果显示SKAP2,NCK2,cortical actin共同聚集在细胞网状突触,证实了SKAP2和NCK2在actin重组中的重要作用。总之,我们的结果阐明了:1)HSF4在晶状体上皮细胞中调控SKAP2的表达;2)SKAP2在晶状体上皮细胞中调控由FGF-b诱导的细胞骨架重组;3)调控actin重组的机制是SKAP2通过与NCK2结合聚集在网状突出的细胞膜上,并共定位在细胞黏连蛋白(focal adhesions)上。
我们的进一步研究显示SKAP2发挥作用的方式与ERK通路也有关系,首先,HSF4的缺大小鼠的ERK水平在出生5天以后被显著性的下调,同时作为HSF4的下游基因的SKAP2能够调节ERK的活性。
综合以上实验结果,我们可以看到SKAP2是HSF4基因下游的一个重要基因,该基因的活性会影响小鼠和人晶状体上皮细胞中actin的重组,并且这一过程可能与ERK通路相关。结果预示着SKAP2很可能作为一种新的桥梁蛋白来连接细胞骨架和细胞膜上的受体。我们的结果为在一定程度上阐明白内障发病的分子机制,为白内障的治疗和进一步的研究提供了一定的理论基础。