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目的乙酰肝素酶(Heparanase, HPSE)是体内唯一可以降解细胞外基质中的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(Heparan sulfate proteoglycan, HPSG)一种葡萄糖醛酸内切酶,可促进肿瘤的侵袭和转移。基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及其受体CXCR4参与许多病理生理过程,包括引起肿瘤细胞产生趋化运动,而肿瘤细胞的趋化运动与肿瘤体内侵袭转移存在密切关系。细胞外基质的降解和肿瘤细胞的定向运动是肿瘤浸润转移两个重要过程,研究显示乙酰肝素酶高表达与乳腺癌的侵袭转移相关,SDF-1/CXCR4生物学轴的激活在乳腺癌向特定组织器官转移的过程中也起到关键作用,但乙酰肝素酶与SDF-1/CXCR4生物学轴在乳腺癌发生发展过程中是否存在协同作用尚无人探讨。本研究采用免疫组化及RT-PCR方法联合检测乙酰肝素酶、SDF-1、CXCR4在乳腺浸润癌、导管原位癌、癌旁组织中的表达,旨在明确乙酰肝素酶和SDF-1／CXCR4生物学轴在乳腺癌生长、浸润、转移中的作用,探讨两者的相关性。方法1、材料乳腺浸润癌、乳腺导管原位癌及癌旁组织均取自沈阳医学院奉天医院2002年9月—2007年12月手术切除标本,其中免疫组化方法检测标本经10%中性福尔马林溶液固定,石蜡包埋,RT-PCR方法检测标本新鲜组织立即放入-80℃冰箱保存备用。2、免疫组化免疫组织化学染色采用SP法,将石蜡包埋的组织制成4μm厚的切片,常规二甲苯脱蜡,梯度酒精水化；修复抗原；滴加SP法检测试剂(具体操作按照说明书进行)；乙酰肝素酶、SDF-1和CXCR4抗体均按1：100倍稀释；PBS代替一抗做阴性对照,已知阳性切片做阳性对照；4℃过夜；AEC显色5—10min；苏木素复染；AEC封片胶及中性树胶封片。3、RT-PCR总RNA提取过程严格按照RNAiso Plus试剂说明书进行。反转录过程也按试剂说明书进行操作。循环条件为：94℃预变性3 min,94℃变性30 s,53.5℃、59.5℃、56.5℃、58.5℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环后于72℃延伸5 min。PCR反应产物的大小分别是288bp(HPSE)、366 bp(CXCR4)、124 bp(SDF-1)和224 bp(GAPDH),PCR产物经EB染色,2%琼脂糖凝胶电泳,实验重复三次。采图并经Image J软件进行灰度定量分析。4、统计分析数据处理采用SPSS 13.0统计软件,P<0.05有统计学意义。实验结果1、免疫组化乙酰肝素酶、SDF-1及CXCR4在乳腺浸润性癌与导管原位癌,导管原位癌与癌旁组织中的表达两两比较均有差异(P<0.05),三者在乳腺浸润性癌中的表达呈正相关(P<0.05),其中乙酰肝素酶和CXCR4表达与乳腺癌的淋巴结转移和分期有关(P<0.05)。2、RT-PCR乙酰肝素酶mRNA在乳腺浸润性癌与导管原位癌,乳腺浸润癌与癌旁组织中的表达两两比较均有差异(P<0.05),导管原位癌与癌旁组织的表达无差异(P>0.05),SDF-1与CXCR4mRNA在乳腺浸润性癌与导管原位癌,导管原位癌与癌旁组织中的表达两两比较均有差异(P<0.05),三者mRNA在乳腺浸润性癌中的表达呈正相关(P<0.05)结论乙酰肝素酶和SDF-1／CXCR4生物学轴在促进乳腺癌的发生发展以及侵袭转移过程中均起到重要促进作用,且两者可能起协同作用。