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目的: 本课题旨在中医理论指导下,通过动物实验和细胞实验,观察手术和十全大补汤对结肠癌肝转移瘤生长的影响,以及十全大补汤、过表达DLL4对结肠癌细胞的影响。探讨围手术期十全大补汤的治疗效果,以及十全大补汤能否通过DLL4/Notch通路抑制结肠癌原发瘤切除后肝转移瘤的生长。为恶性肿瘤围手术期运用提高疗效奠定理论基础。 方法: 1.动物实验分组:原发瘤未切除(TP),原发瘤切除(TR),原发瘤未切除加十全大补汤(TP+SDT),原发瘤切除加十全大补汤(TR+SDT);细胞实验分组:空白对照(control)、过表达DLL4(DLL4)、十全大补汤(SDT)、过表达DLL4加十全大补汤(DLL4+SDT); 2.构建结肠癌肝转移模型,利用卡钳法和HE染色法观察,结肠癌肝转移瘤的转移情况和转移瘤的细胞形态,探讨十全大补汤和原发瘤切除术对肝转移瘤生长的影响; 3.构建过表达DLL4稳定的CT-26细胞株,采用CCK-8检测肿瘤细胞活性,transwell测试肿瘤细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡,WB检测结肠癌细胞DLL4和Notch靶基因Hes1、Hey1、Hey2蛋白水平的变化; 4.分别采用免疫组化、tunel检测转移瘤细胞增殖、血管数量和密度以及凋亡的变化。WB检测结肠癌肝转移瘤细胞DLL4和Notch靶基因Hes1、Hey1、Hey2蛋白水平的变化。 结果: 1.原发瘤切除组与原发瘤未切除组比较,肝转移瘤的发生率高、肝脏表面肿瘤结节数较多,肿瘤细胞排列紧密,分界不清,可观察到新生血管;十全大补汤可以抑制肝转移瘤的生长(P<0.05); 2.原发瘤切除组与原发瘤未切除组比较,肝转移瘤细胞增殖能力更强、血管数量和血管密度增加、凋亡减少;十全大补汤可以抑制肝转移瘤细胞增殖,减少血管生成、促进肿瘤细胞的凋亡(P<0.05); 3.原发瘤切除组与原发瘤未切除组比较,肝转移瘤细胞的DLL4和Notch靶基因 Hes1、Hey1、Hey2均有升高;十全大补汤可以抑制这些基因的表达(P<0.05)。 4.过表达DLL4与对照组比较,结肠癌细胞增殖加快、侵袭能力加强、凋亡减少;十全大补汤可以抑制结肠癌细胞的增殖、侵袭、促进肿瘤细胞的凋亡(P<0.05); 5.过表达DLL4与对照组比较,结肠癌细胞DLL4和Notch靶基因Hes1、Hey1、Hey2均有升高;十全大补汤可以抑制这些基因的表达(P<0.05)。 结论: 1.原发瘤切除能促进结肠癌肝转移瘤的生长,促进转移瘤细胞的增殖,增加血管新生的数量;这可能与DLL4升高,激活Notch信号通路有关; 2.围手术期应用十全大补汤能够抑制结肠癌原发瘤切除后肝转移瘤的生长,其机制除了十全大补汤直接抑制肿瘤细胞增殖外,可能与抑制DLL4/Notch信号通路,减少肿瘤血管新生有关。