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癌症是当前危害人类健康的主要疾病之一,现有的常规治疗方法因其局限性和副作用,严重影响了疗效的提高。血管生成疗法——通过抑制新生血管的生成抑制肿瘤组织内肿瘤细胞的生长和转移,因其特异性强、无耐药性等优点为治疗癌症开辟了新途径。因此,寻找抑制新生血管生成的物质、尤其是原料丰富的天然产物成为肿瘤防治的研究热点之一。真菌是一类具有多种生物功能的中药,许多真菌都有抗肿瘤的生物活性,其中某些成分可能通过抑制新生血管生成实现其抗肿瘤的生物功能。本课题以真菌灵芝多糖粗提物及其组分为主要研究对象,观察其对整体模式动物——flk-GFP转基因斑马鱼的节间血管的影响,希望能证实抑制血管生成是灵芝的抗肿瘤机制之一,并找到抑制血管生成的关键成分。主要研究内容及结论如下:
(1)采用细胞平板培养-胚胎浸没给药法对几种真菌提取物在flk-GFP转基因斑马鱼的抗血管生成作用进行分析,结果灵芝多糖粗提物对flk-GFP转基因斑马鱼的节间血管的生长具有抑制作用。
(2)采用乙醇分级沉淀法分离灵芝多糖粗提物,并得到分别包含4个不同组分的3组产物,这12个组分包括:GLⅠ、GLⅡ、GLⅢ、GLⅣ、GLⅤ、GIⅥ、GLⅦ、GLⅧ、GLⅨ、GLⅩ、GLⅪ、GLⅫ。
(3)采用细胞平板培养—胚胎浸没给药法对灵芝多糖粗提物的12个组分在flk-GFP转基因斑马鱼的抗血管生成作用进行分析,结果GLⅧ对flk-GFP转基因斑马鱼的节间血管的生长具有抑制作用。
(4)采用系统成分预试验法对灵芝多糖粗提物、GLⅤ、GLⅥ、GLⅦ、GLⅧ I进行成分分析,结果灵芝多糖粗提物和组分GLⅧ共有的成分三萜或皂苷可能是抑制血管生成的关键成分。
(5)采用液质联用法对GLⅧ进行分析,结果GLⅧ中包含10种分子量从250~650不等的物质,其中4种物质可能与现有灵芝有效成分数据库中的灵芝酸Ma等6种物质的相似度较高。
本论文发现灵芝多糖粗提物能在flk-GFP转基因斑马鱼体内特异性抑制血管生成,证实了抑制血管生成是灵芝抗肿瘤作用的机制之一;分离得到了抑制血管生成的灵芝有效组分,并分析了灵芝有效组分抑制血管生成的可能关键物质,为进一步研究灵芝中抑制血管生成的单体提供了前提。