第一部分Jagged-1在人卵巢癌中被Notch3和WNT/β-catenin途径调控卵巢癌是一种恶性度高,侵袭性强的恶性肿瘤。我们在之前的研究工作中,已经证实了Notch3在人卵巢浆液癌中扩增和表达上调,Notch通路活性高低对于卵巢癌耐药性亦有十分重要的意义。在Notch3的众多配体中,Jagged-1在卵巢癌组织中表达最高,而且Jagged-1与Notch3表达水平成正相关性。本研究中我们发现了Jagged-1表达受Notch3信号调控。沉默Notch3或与其互相作用的转录因子RBPjk,都能抑制Jagged-1在卵巢癌细胞中的表达。在人类卵巢上皮细胞中外源性表达Notch3胞内段N3ICD或转基因小鼠诱导过表达人Notch3,均可以上调Jagged-1表达。除此之外,抑制WNT/β-catenin信号,也使Jagged-1表达降低。同时下调Notch3和WNT信号对抑制癌细胞增殖和降低Jagged-1表达作用均明显大于单一途径抑制。综上,在卵巢癌中,配体Jagged-1与受体Notch3其存在正反馈的调节关系,Jagged-1也同时被WNT/β-catenin途径调控。上述两种配体调控途径都能影响Notch3言号途径,导致卵巢肿瘤的发生。第二部分运用ChIP-chip芯片技术研究Notch3在人卵巢癌细胞中的调控机制Notch通路在肿瘤发生发展中有着非常重要的作用,阐明Notch信号通路调控机制是了解此通路具体作用的基础。应用ChIP-on-chip技术,我们发现了一系列基因启动子区域均结合有CSL/N3ICD转录因子复合物。运用生物信息学技术分析后,发现一种新CSL可结合序列" GTTGCCAT "。接下来的研究中,我们选择一些可同时被γ-分泌酶抑制剂和Notch3 shRNA抑制的基因作为Notch3通路下游候选基因。在这些基因中,HURP编码产物由于参与细胞有丝分裂过程,视为代表。当Notch通路抑制时,实时定量PCR和蛋白免疫印迹分别检测其mRNA和蛋白表达量均降低。凝胶电泳迁移率实验(EMSA)表明RBPjk可以与其启动子区域结合。启动子荧光素实验表明无论是经典的CSL结合序列和新发现的结合序列均能影响基因表达。沉默HURP后,可使细胞停滞于G2/M期从而抑制细胞增殖和裸鼠移植瘤成瘤性。外源表达HURP可以部分削弱γ-分泌酶抑制剂或Notch3 shRNA对于细胞增殖的抑制作用。综上,在卵巢癌中,HURP是Notch3下游靶基因,且至少Notch3信号的部分作用是通过调控其表达而得以实现的。