甘蓝小孢子培养技术体系的优化与植株再生技术研究

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探究甘蓝小孢子培养效果,非子叶型胚再生不定芽和不定芽成苗的影响因素,提高甘蓝小孢子胚状体诱导和再生植株效果,增强DH植株生长势和翌年抽苔率,加快甘蓝单倍体育种进程。本试验研究了整枝方式,NLN-14培养基中添加外源激素褪黑素(MT)和对氯苯氧异丁酸(PCIB)以及生化物阿拉伯半乳聚糖(AG)的浓度对甘蓝诱导出胚效果的影响。MS培养基中分别添加KT和NAA浓度不同比例、PCIB浓度和AgNO3浓度对非子叶型胚分化不定芽的影响。MS培养基中添加MT和NAA浓度对甘蓝胚状体不定芽成苗的影响。研究获得以下结果:1.小孢子供体植株抽苔显蕾时,整枝保留20%、50%和80%的一级分枝,花蕾中单核靠边期小孢子所占比率和出胚率均比对照显著性增加。整枝保留50%的一级分枝,与对照相比,花蕾中小孢子发育处于单核靠边期所占比率增加122.38%,出胚率增加3.2胚/蕾,子叶型胚比率增加0.77%。2.NLN-14小孢子培养基中添加适宜的MT、AG和PCIB浓度比对照能显著性地提高胚状体诱导效果,且不同添加剂对不同材料影响效果不同。添加1.0μmol/LMT,早熟材料新绿洲出胚率最高达19.5胚/蕾;添加20mg/LAG,中熟材料C64出胚率最高达9.8胚/蕾;添加40μmol/LPCIB,晚熟材料C69出胚率最高达18.5胚/蕾。3.材料惠2非子叶型胚MS分化培养基中分别添加1.0mg/L KT和0.02mg/L NAA促使不定芽分化率高达26.67%,比对照提高20.0%;添加40μmol/L PCIB促使不定芽分化率高达16.67%;添加210mg/L AgNO3不利于非子叶型胚转绿,但适宜浓度能促进转绿胚分化不定芽。4.不定芽成苗MS培养基中添加5μmol/L MT和0.1mg/L NAA比对照能显著性地促进DH植株生根和快速健壮生长,且对DH-A、DH-B和DH-C材料均有促进作用,但材料间差异性不显著;三种材料DH植株翌年抽苔率分别比对照提高33.4%,20.0%和20.0%。
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