野花生豆凝集素的分离纯化及部分性质研究

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野花生豆(Crotalaria mucronata)经磨粉、浸取、硫酸铵分级沉淀、猪胃粘蛋白-Sepharose 4B亲和层析、Sephacryl S-200 HR分子筛层析可得到一表观分子量为103KD且对A型血红细胞专一凝集的野花生豆凝集素(Crotalaria mucronata Lectin,CML).纯化的CML在PAGE和SDS-PAGE中均显示单一蛋白带.用等电聚焦电泳法测得CML的等电点为5.7.在含8mol/L脲和不含脲的缓冲体系中,用N-乙基顺丁烯二酰亚胺(NEM)修饰CML的巯基,计算每个CML分子中被修饰的巯基数目分别为3.1和3.2个,修饰后CML的凝血活性无明显变化.CML共有5.9个色氨酸残基.在含8mol/L脲和不含脲的缓冲体系中,用N-溴代丁二酰亚胺(NBS)修饰CML的色氨酸残基.天然状态的CML的远紫外圆二色谱表明CML分子中含有较多的β折叠.测定不同pH、温度及不同浓度盐酸胍中的CML的圆二色谱以及在这些条件下CML凝血活性的变化.抑菌实验表明CML对枯草杆菌、大肠杆菌K12、地衣芽孢杆菌、类产碱假单胞菌和金黄色葡萄球菌的生长都无抑制作用.
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