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湿地松(Pinus elliottii)松脂产量高,品质优,材性好,具有很高的经济价值。为了更好了解美国引进的111个高产脂湿地松家系遗传背景,本文拟采用方便且多态性高的SSR标记,从DNA水平上研究分别种植在景德镇枫树山林场和吉安市白云山林场的111个高产脂湿地松家系亲缘关系。本研究利用松属EST数据库,开发湿地松的SSR引物,筛选出多态性好、重复率高的引物,分析SSR位点分布特征和SSR重复基元的特征,采用Popgene软件分析SSR位点的多态性,NTYS软件对111个湿地松样本进行聚类分析。研究结果如下: (1)利用MISA共检测到7542个SSR位点,分布频率为6.25%。共得到6482条含SSR的序列,发生频率为5.37%。结果表明湿地松SSR重复类型丰富,其中1、2、3核苷酸重复数最多,占全部SSR位点的97.24%。其中单核苷酸重复占总数的50.85%,二核苷酸重复占16.47%,三核苷酸重复占29.93%,四、五、六核苷酸含量较少。湿地松SSR各基元重复长度在10-195bp范围内,其中10-13bp最多,占总数的42.51%,14-17bp的重复序列分布频率为27.58%,19-21bp的重复序列分布频率为14.26%,22-195bp的重复序列分布频率为15.65%。重复基元类型共96种。其中A/T分布频率为46.95%,C/G分布频率为3.9%,AT/AT分布频率为9.76%,AG/CT分布频率为4.4%,AC/GT分布频率为2.16%,CG/CG分布频率为0.15%,AGC/CTG分布频率为6.36%,ACT/AGT分布频率为0.46%。 (2)利用松属植物的EST数据库,开发用于湿地松研究的SSR标记,设计了256对引物,在256对引物中有65对引物有扩增产物,扩增效率25.39%;经过8%聚丙烯酰氨凝胶电泳复筛,共筛选出有多态性的引物39对,多态率为15.23%,作为后期研究湿地松群体遗传多样性和群体结构的EST-SSR分子标记。 (3)从39对引物中挑选出适用于111个湿地松大样本的谱带清晰、多态性好、重复性好的7对引物。采用Popgenge软件分析发现7对SSR引物的多态性位点7个,多态性为100%。7个SSR位点在111个湿地松样本中共检测到21个等位基因(na),平均每个位点扩增出3个等位基因;扩增出12.89个有效等位基因(ne),其中1-5872位点的有效等位基因数最多,为2.74,而4-3919位点最少为1.20个,平均每个位点的有效等位基因数为1.84。1-5872位点的Shannon多样性指数(Ⅰ)最高,为1.05,而4-3919位点最低,为0.332,平均每位点Ⅰ值为0.73。1-5872位点的期望杂合度(He)最高,为0.64,而4-3919位点最低,为0.17,平均每个位点的He为0.43。1-5872位点的观察杂合度(Ho)最高,为0.67,而位点4-3919最低,0.02,平均每个位点的Ho为0.40。湿地松Neis多样性指数(Neis)在0.349~0.6349之间,平均为0.42,1-5872的Neis最高为0.63,最低的为4-3919,仅为0.17。 (4)研究发现景德镇54号和106号样本和其他样本亲缘关系较远。在遗传相似系数为0.62处111个样本聚为七类。编号景德镇16和吉安43、12号聚为一类;景德镇11、31和吉安65、72、103、107聚为一类;景德镇105、19、71、62、47、58、76、97号和吉安100号聚为一类;吉安110、89、69、42、20聚为一类;景德镇54号样本聚为一类;景德镇106号样本聚为一类;其余的聚为一类。