哮喘小鼠气道中性粒细胞对Th17细胞趋化募集作用机制的研究

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目的1.研究小鼠BALF与血清中趋化因子CCL2和CCL20在正常组和哮喘组的表达变化,探讨小鼠BALF中CCL2、CCL20与中性粒细胞数目之间的相关性。2.研究正常组和哮喘组小鼠外周血Th17细胞比例,以及Th17细胞表面相应受体CCR2和CCR6的表达变化。3.体外实验探讨CCL2、CCL20对Th17细胞的趋化募集作用。材料与方法制备急性哮喘小鼠模型,取BALF细胞沉淀进行分类计数,ELISA检测BALF上清及血清CCL2、CCL20的含量。流式细胞术测量小鼠外周血Th17细胞含量及其表面CCR2和CCR6受体表达水平。磁珠分离小鼠脾脏CD4+T细胞,体外诱导分化培养Th17细胞,Transwell小室观察CCL2、CCL20对Th17细胞的趋化作用。结果1.分别比较支气管肺泡灌洗液(BALF)中的炎性细胞计数和细胞分类计数,哮喘组小鼠BALF内炎性细胞总数和嗜酸性粒细胞数目均高于正常对照组,两组之间差异均有统计学意义[(68±18)×10~4/ml vs (33±5)×10~4/ml,(42±14)×10~4/ml vs(5±2)×10~4/ml](n=10, P<0.01),(n=10, P<0.01)。哮喘组小鼠淋巴细胞数目也高于正常对照组,差异有统计学意义[(5±1)×10~4/ml vs (3±1)×10~4/ml](n=10, P<0.05)。哮喘组小鼠BALF内中性粒细胞数目也高于正常对照组,此差异无统计学意义。2.与正常小鼠比较,哮喘小鼠血清中CCL2和CCL20均增高,均有统计学意义(n=10,P<0.01)。哮喘小鼠BALF中CCL2浓度是高于正常小鼠的(n=10, P<0.01),但是哮喘小鼠BALF中CCL20浓度是低于正常小鼠的(n=10, P<0.01)。3. BALF中CCL2与BALF中性粒细胞数目有显著正相关性(r=0.52, P<0.05)。BALF中CCL20含量与BALF中性粒细胞数目呈显著负相关性(r=-0.63, P<0.01)。4.在外周血中,哮喘小鼠Th17细胞比例(4.65±0.85%)显著高于正常小鼠(0.89±0.53%)(n=10, P<0.01),有统计学意义。并且与正常小鼠比较,哮喘小鼠外周血Th17细胞表面受体CCR2表达也增高(1.69±0.68%vs0.56±0.37%)(n=10,P<0.01),CCR6表达也是增高的(1.80±1.04%vs0.77±0.51%)(n=10,P<0.01)。差异有统计学意义。5.体外诱导分化培养的小鼠Th17细胞,CCL2、CCL20对其存在募集作用,与不加趋化因子组比较,差异均有显著性意义(7.44±1.44%vs0.33±0.05%)(n=6, P<0.05),(5.40±0.64%vs0.33±0.05%)(n=6, P<0.05)。结论哮喘小鼠血清中CCL2、CCL20各自表达较正常组有所增高,哮喘小鼠BALF中CCL2表达较正常组增高,CCL20表达却比正常组低。BALF中CCL2含量与BALF内中性粒细胞数目有一定的相关性。哮喘小鼠外周血Th17细胞比例及其上面的受体CCR2、CCR6较正常组增高。CCL2、CCL20对Th17细胞具有一定的趋化作用。提示哮喘小鼠气道中性粒细胞有可能通过CCL2/CCR2的作用来募集Th17细胞。
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