非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)是一种常见的并非由于过度饮酒、自身免疫、药物感染等因素所导致的慢性肝脏疾病,其包括了良性的肝脏脂肪变性、由其演变的非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis, NASH)和肝硬化,并最终有可能导致肝脏功能障碍。肝脏脂肪的变性以及脂质代谢功能的紊乱会严重影响肝脏的基本功能,并可能导致一系列的病理综合征。随着我国人民生活水平的快速提高,NAFLD的发病率呈逐年上升的趋势,并严重影响了国人的身体健康与生活质量。细胞色素P450酶(Cytochrome P450 enzyme,CYP450)是一类主要存在于肝脏和肠道的单加氧酶系,参与并催化多种内源性物质和外源性物质的代谢,并与NAFLD的发病机制密切相关。CYP450酶系可介导氧自由基的生成以及脂质过氧化,进而导致肝细胞内脂肪的变性、脂肪性肝炎及肝纤维化等一系列病理变化。在NAFLD的发病进程中,CYP450酶系受到多种因素的影响并使其活性和蛋白表达情况发生改变。在以往研究中,NAFLD不同时期CYP450酶活性与蛋白表达的改变往往不同,同一P450酶的亚型的变化往往也存在一些争议。本实验利用高脂乳剂诱导SD大鼠,并成功建立了NAFLD各期模型。通过探针药物法与蛋白免疫印迹法分别检测与NAFLD发病密切相关的CYP1A1和CYP1A2在发病不同时期的活性和蛋白表达变化情况,进而探究之间的作用机制,并为NAFLD的临床治疗用药提供理论依据。本文主要内容概括如下：1.大鼠NAFLD发病进程中CYPlA1酶的活性与蛋白表达研究摘要目的：探测大鼠NAFLD发病进程中CYP1A1酶的活性和蛋白表达的变化状况。 方法：根据高脂乳剂制备大鼠NAFLD的各期模型实验时期特点,分别于第1、9、13、17周处死一批大鼠后取肝脏组织进行伊红苏木精(hematoxylin-eosin, H&E)染色,挑选出能最佳的代表当期模型诊断标准的大鼠并合并,借助反向高效液相色谱法对探针药物乙氧基试卤灵的代谢产物试卤灵的浓度变化和Western blot法对CYP1A1蛋白表达的变化进行测定。结果：根据代谢产物试卤灵的浓度,CYP1A1酶代谢探针药物的活性在正常组为(0.307±0.016μM)、轻度脂肪变性组为(0.343+0.012μM)、重度脂肪变性组为(0.395±0.034μM)、脂肪性肝炎组为(0.457±0.049μM)。根据Western blot结果,随着NAFLD的严重程度发展CYP1A1酶的蛋白表达逐渐增加。 结论：在大鼠NAFLD发病进程中,CYP1A1的活性和蛋白表达均呈上升趋势。2.大鼠NAFLD发病进程中CYP1A2的活性与蛋白表达研究摘要目的：对大鼠NAFLD发病进程中各个病理时期CYP1A2酶的活性和蛋白表达的变化状况进行观测。方法：高脂乳剂制备大鼠NAFLD的各期模型后,利用反向高效液相色谱法测定探针药物非那西丁的代谢产物对乙酰氨基酚的变化和利用Western blot法测定CYP1A2蛋白的表达变化。 结果：通过测定的对乙酰氨基酚结果得出,随着病程的发展,探针药物的活性在正常组(1.79±0.15μM)、轻度脂肪变性组为(2.43±0.18μM)、重度脂肪变性组为(1.71±0.18μM)、脂肪性肝炎组为(1.42±0.09μM),而Western blot结果,则是随着病程的发展持续降低。结论：随着大鼠NAFLD发病程度的加重,CYP1A2的活性短暂上升后持续下降,而蛋白表达则呈持续下降的趋势。