目的:人羊膜上皮细胞(hAECs)具有胚胎干细胞及多能干细胞的特征,羊膜细胞体外诱导后能分化成胚胎发育的三个胚层细胞:内胚层(肝和胰腺细胞等)中胚层(心肌细胞等)外胚层(神经细胞等)。羊膜细胞能分化成各种组织,我们对人羊膜上皮细胞进行体外分离培养,并观察其生物学特性及在移植到大鼠体内的存活迁移及分化。观察细胞移植对脑出血大鼠脑水肿及大鼠神经功能恢复的影响。方法:1取健康孕妇剖宫产后羊膜,经胶原酶和胰蛋白酶消化后,对人羊膜上皮细胞进行分离培养,并对分离的羊膜细胞进行HE染色。2依据大鼠脑图谱,用四型胶原酶立体定向注射制作大鼠尾状核脑出血模型,对大鼠神经功能进行评价。将用Hoechst33258标记的人羊膜上皮细胞移植入脑出血大鼠侧脑室,并对大鼠脑组织进行冰冻切片,焦油紫染色,显微镜下观察。3大鼠尾状核脑出血模型建立后24小时,将慢病毒转染EGFP的羊膜细胞移植入尾状核出血侧侧脑室。神经功能评价采用Menzies评分法及平衡木测试。随后处死大鼠取脑,测定大鼠脑水含量,制作冰冻切片,免疫组化染色观察。结果:1培养的人羊膜上皮细胞贴壁生长,细胞呈圆形,多角形,核较大。2大鼠脑出血模型行为学检测评分明显低于正常大鼠,有统计学意义,焦油紫染色显示大鼠出血灶神经组织损伤明显。HAECs侧脑室移植后,Hoechst33258标记的人羊膜上皮细胞呈蓝色荧光,分布大鼠侧脑室内,细胞呈圆形,多角形,与宿主整合良好,无异常增生。3大鼠侧脑室移植HAEC-EGFP后4周,荧光显微镜下可见HAEC-EGFP沿侧脑室壁生长,细胞轮廓清晰,呈绿色荧光。Vimentin免疫组化检测可见部分人羊膜上皮细胞呈阳性表达。大鼠神经功能检测显示,移植组在移植2天后神经功能明显改善,Menzies评分法及平衡木测试评分均高于对照组,两组相比有统计学意义(P＜0.05)。移植后第二、三、七天,移植组脑出血大鼠脑水含量测定明显低于对照组,两组比较有统计学意义。小胶质细胞免疫组化观察移植组小胶质细胞计数明显低于对照组,二者比较有统计学意义。结论:1人羊膜上皮细胞移植到脑出血大鼠侧脑室4周后仍可存活并且表达神经元特异性抗原。2人羊膜上皮细胞移植可以改善脑出血大鼠的运动功能。3人羊膜上皮细胞移植可以抑制脑出血后小胶质细胞激活,减轻脑出血后急性期脑水肿。