动物传染病给养殖业造成严重的经济损失,是人们普遍关注的问题。虽然疫苗免疫接种是防治动物传染病的一个重要手段,但在很多情况下动物接种疫苗后不能产生有效的免疫应答。为了提高疫苗免疫效果,常在疫苗中添加佐剂。迄今,已有100多种物质被报道有佐剂作用,从中药人参(Panax ginseng C. A. Meyer)干燥根中提取的皂甙成分人参皂甙(GS)是其中之一。前期研究亦表明,GS对猪细小病毒病疫苗、猪丹毒菌疫苗和奶牛金黄色葡萄球菌疫苗均有具有免疫佐剂作用。但是GS成本较高,难以在畜牧业生产上推广应用。化学分析表明,人参的茎、叶、花蕾和果实等地上部分中亦含有与人参根中相似的皂甙类成分,并且人参茎叶中皂甙(ginseng stem-and-leaf saponins, GSLS)含量明显高于人参根中皂甙的含量。药理试验表明,GSLS与人参根皂甙(GS)具有相似的药理作用。GSLS价格相对低廉,因而开发利用研究人参地上部位来源的皂甙成分,尤其是GSLS具有更高的经济价值。本论文通过研究口服GSLS对于鸡免疫新城疫弱毒疫苗的免疫效果,确定出合理的给药方法。在此基础上研究口服GSLS对新城疫和禽流感灭活疫苗的免疫效果。论文还从体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫角度探讨口服GSLS对鸡免疫增强作用的机制,从而为养鸡生产上推广应用GSLS提供依据。试验一、口服不同剂量GSLS对鸡滴鼻免疫新城疫弱毒苗引起的抗体水平的影响目的研究口服不同剂量GSLS对鸡滴鼻免疫新城疫弱毒(NDV)苗后其抗体水平的影响,观察其量效关系,确定口服GSLS的有效剂量范围。方法健康1日龄海兰蛋公雏84只,随机分为6组,每组14只。组1～4,在疫苗免疫前口服不同剂量的GSLS(2.5、5、10、20 mg/kg BW),饮水给药,连用3天；组5,免疫前口服10 mg/kg BW的盐酸左旋咪唑,饮水给药,连用3天；组6,免疫前不给药。在第14和28日龄给鸡滴鼻接种鸡新城疫Ⅳ系弱毒苗(LaSota株)。分别于免疫前和免疫后7、14、21、28和35天给动物称重、采血,分离血清,检测血清中血凝抑制效价(HI)。结果和结论与对照组相比,口服5 mg/kg BW GSLS可显著增强鸡血清NDV特异性HI效价(P<0.01),而口服左旋咪唑虽然在数值上增加了HI效价,但无统计学差异(P>0.05)。因此,在以后试验中选择5 mg/kg BW的GSLS给药剂量。试验二、口服不同天数GSLS对鸡滴鼻免疫新城疫疫苗引起的抗体水平的影响目的研究口服不同天数GSLS对鸡滴鼻免疫新城疫疫苗后其抗体水平的影响,观察其时效关系,确定口服GSLS的最佳天数。方法健康1日龄海兰蛋公雏120只,随机分为6组,每组20只。组1-3,在疫苗免疫前分别饮水给药GSLS 3、5、7天,剂量为5 mg/kg BW；组4,疫苗免疫前饮水口服盐酸左旋咪唑3天,剂量为10 mg/kgBW；组5,免疫前不给药,组6,不免疫也不给药。免疫方法与试验一相同。分别于免疫前和免疫后7、14、21、28和35天,采血,分离血清,检测血清中HI效价。结果和结论与对照组相比,口服不同天数GSLS均可显著增强鸡血清NDV特异性HI效价(P<0.05或P<0.01),不同给药天数增强HI效价的水平从高到低依次为：7天>5天>3天。因此,后来我们选择饮水口服GSLS 7天,剂量为5 mg/kg BW进行试验。试验三、免疫前、后口服GSLS对鸡滴鼻免疫新城疫疫苗引起的免疫反应的影响目的研究免疫前、后口服GSLS对鸡滴鼻免疫新城疫疫苗引起的免疫反应的影响,从而确定口服GSLS最佳给药时间,并探讨口服GSLS免疫增强作用的机制。方法健康1日龄海兰蛋公雏88只,随机分为4组,每组22只。组1-2,在免疫前或者免疫后饮水口服GSLS 7天,剂量为5 mg/kg BW；组3,免疫但不给药,组4,不免疫也不给药。疫苗免疫方法同试验一。分别于免疫前和免疫后7、14、21、28和35天,采血,分离血清,检测血清HI效价。并于二免后2周和4周,处死鸡后取脾脏,分离脾淋巴细胞,用MTT法检测淋巴细胞增殖情况。二免后4周,取鸡十二指肠和空肠置中性甲醛溶液固定,采用免疫组化(IHC)及H.E.染色检测鸡小肠中IgA阳性细胞面积和肠内皮淋巴细胞(iIEL)数目。结果和结论与对照组相比,免疫前口服GSLS可显著增强鸡的血清HI效价,脾脏淋巴细胞对NDV的刺激指数,小肠IgA阳性细胞面积和小肠绒毛中ilEL的数目(P<0.05或P<0.01)；并且免疫前口服GSLS试验组在血清HI效价、脾脏淋巴细胞对NDV的刺激指数和小肠绒毛中ilEL的数目等多项指标上,要显著高于免疫后口服GSLS试验组(P<0.05)。因此,本试验结果表明免疫前口服GSLS对鸡的增强免疫效果要优于免疫后给药。免疫前口服GSLS不仅可以提高机体全身免疫功能,还可促进局部黏膜免疫功能。试验四、口服GSLS对鸡免疫新城疫灭活疫苗后抗体水平的影响目的评价饮水口服GSLS对鸡免疫鸡新城疫灭活疫苗后抗体水平的影响。方法健康1日龄海兰蛋公雏50只,随机分为2组,每组25只。组1,在免疫前连续饮水口服GSLS 7天,剂量为5 mg/kg BW；组2,免疫但不给药,为对照组。两组鸡在第14和35日龄进行胸肌注射接种鸡新城疫灭活疫苗(LaSota株)。于免疫前和免疫后7、14、21、28、35、42和49天采血,分离血清,检测血清HI效价。结果与结论与对照组相比,免疫前口服GSLS可显著增强鸡血清HI效价(P<0.05或P<0.01),表明免疫前口服GSLS对鸡ND灭活疫苗免疫具有增强作用。试验五、口服GSLS对鸡免疫禽流感灭活疫苗引起的抗体水平的影响目的评价饮水口服GSLS对鸡免疫鸡禽流感灭活疫苗后抗体水平的影响。方法健康28日龄海兰蛋鸡7500只,随机分为2组,每组3750只。组1,在免疫前连续饮水口服GSLS 7天,剂量为5 mg/kg BW；组2,免疫但不给药,为对照组；两组鸡于第35日龄颈部皮下注射鸡禽流感灭活疫苗(H5N1亚型)。于免疫前和免疫后2、9、16、23、49、56和63天,每组随机对45只鸡采血,分离血清,检测血清特异性HI效价。结果与结论与对照组相比,免疫前饮水口服GSLS均可显著增强鸡血清特异性HI效价(P<0.05或P<0.01),表明免疫前口服GSLS对鸡免疫禽流感灭活疫苗同样具有免疫增强作用。综上所述,饮水口服GSLS对鸡免疫鸡新城疫弱毒疫苗、鸡新城疫灭活疫苗和禽流感灭活疫苗均具有免疫增强作用。给鸡饮水口服GSLS(5 mg/kg BW)7天可显著提高鸡疫苗免疫后血清特异性HI效价、脾脏淋巴细胞增殖反应、小肠IgA阳性细胞面积及小肠上皮内淋巴细胞数目。疫苗免疫前给药效果要优于免疫后给药。本研究结果对于在养鸡生产上采用人参茎叶皂甙提高鸡的免疫效果具有重要实用价值。