【摘 要】
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目的:研究重组腺病毒AdCD40Ig联合供体静息B淋巴细胞预处理策略在小鼠诱导建立特异性移植耐受,延长后续进入的供体来源皮肤移植物存活时间的作用.方法:自BALB/c小鼠脾脏提取
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目的:研究重组腺病毒AdCD40Ig联合供体静息B淋巴细胞预处理策略在小鼠诱导建立特异性移植耐受,延长后续进入的供体来源皮肤移植物存活时间的作用.方法:自BALB/c小鼠脾脏提取总RNA,以两对引物分别RT-PCR克隆小鼠CD40胞外区基因片段和小鼠IgG2a Fc段基因片段,并通过两对引物之间特殊设计的17bp重叠区域,以重叠延伸法PCR扩增出CD40Ig融合基因,后者克隆入pMD18-T进行测序.将测序证实的CD40Ig基因克隆入腺病毒载体AdEasy系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV,再与其骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ51 83中同源重组,经过293细胞包装生成携带小鼠CD40Ig基因的重组腺病毒载体AdCD40Ig.PCR鉴定重组病毒,荧光计数测定重组病毒滴度,SDS-PAGE电泳和ELISA法检测鉴定培养细胞的上清中CD40Ig蛋白表达.建立小鼠皮肤移植模型,设定空白对照(1组)和第三方空白对照(2组),以AdCD40Ig(3组)、C57BL/6静息B细胞(4组)、AdCD40Ig联合供体静息B细胞(5组)及第三方实验对照(6组)等不同组合在皮肤移植前1周预先处理受体BALB/c小鼠,观察皮肤移植物存活情况.双抗夹心法ELISA测定AdCD40Ig处理后小鼠血清CD40Ig水平.结论:1.成功构建携带小鼠CD40Ig基因的重组腺病毒AdCD40Ig,病毒滴度可达5×10<9> efu/ml,体外、体内实验证实该载体能够稳定有效地表达CD40Ig融合分子.2.以AdCD40Ig联合供体静息B细胞预处理策略能在小鼠皮肤移植模型中成功诱导建立特异性移植免疫,显著延长后续进入的供体来源皮肤移植物存活时间,提示这是一种具有临床应用前景,值得深入研究的免疫耐受诱导策略.
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