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黑曲霉作为重要的工业菌种,可生产淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、柠檬酸、葡糖酸和没食子酸等。在产纤维素酶方面,黑曲霉已成为食品工业及饲料工业研究的热点。本文利用中国工业微生物菌种保藏中心提供的用于产纤维素酶的菌株黑曲霉(AS3.316),对其最佳产酶培养基及培养条件进行了优化研究,采用中国科院近代物理研究所、国家重点实验室重离子加速器产生的12C+6重离子束,在不同辐照剂量下对黑曲霉(AS3.316)进行诱变及选育,研究结果如下:(1)以纤维素酶活力为指标,采用单因素及正交试验对黑曲霉(AS3.316)产纤维素酶的最佳培养基及培养条件进行了优化研究。结果表明,黑曲霉(AS3.316)产纤维素酶的最佳培养基为:玉米秸秆粉60g,麦麸40g,Tween-804ml,硫酸铵8g,磷酸二氢钾0.5g,氯化钠0.15g,硫酸亚铁0.05g,硫酸镁0.2g,水1000ml,在该培养基中可有效诱导黑曲霉纤维素酶的产生;按照9%接种量接入已优化的培养基,在温度28℃,初始pH4.5,转数220r/min的培养条件下于摇床培养72h,黑曲霉滤纸酶活力、纤维素内切酶活力、纤维素外切酶活力及β-葡萄糖苷酶活力可达到24.18U/ml、30.59U/ml、9.28U/ml和14.12U/ml,产酶效果良好。(2)采用20Gy、40Gy、60Gy、80Gy、100Gy、120Gy、140Gy剂量的重离子束对黑曲霉(AS3.316)进行辐照诱变,研究了辐照剂量与致死率的关系及辐照剂量与突变率的关系,得出黑曲霉(AS3.316)的致死剂量为140Gy;辐照剂量与突变率呈现波浪状趋势。经初筛、复筛得到了12株正向突变体,分别为:T1-1、T1-2、T2-1、T2-2、T3-1、T5-1、T5-2、T5-3、T6-1、T6-2、T6-3、T6-4,其纤维素酶活力均有不同程度提高。在120Gy辐照剂量下,共获得4株正向突变体,其中突变体T6-4的纤维素酶活力提高最多,滤纸酶、纤维素内切酶、纤维素外切酶、β-葡萄糖苷酶活力分别达到了71.3U/ml、116.2U/ml、29.9U/ml、和35.9U/ml,与初始菌株相比,酶活力分别提高了2.91倍、3.79倍、3.11倍、2.70倍。(3)12株突变体稳定性测定结果表明,5株突变体相对稳定,分别为T2-1、T3-1、T5-1、T6-3、T6-4。这5株相对稳定的突变体纤维素酶活力由高到低依次为T6-4>T6-3>T5-1>T3-1>T2-1。经9代传代,纤维素酶活力变异率均小于5%。