参环毛蚓中抗栓活性蛋白酶的研究

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参环毛蚓Pheretima aspergillum(E.Perrier)为钜蚓科Megascolecidae环毛属Pheretima动物。习称广地龙,为常用中药,中药地龙在中国药典中收录的品种还有通俗环毛蚓Pherefima Vulgaris chen,威廉环毛蚓Pheretima guillelmi(Michaelsen),栉盲环毛蚓Pheretimapectinifera Michaelsen的干燥体。后三者习称为“沪地龙”。性寒,味咸,归肝、脾、膀胱经。具有清热息风、通经络、平喘、利尿之功效。主治高热惊痫,气虚血滞,半身不遂,肺热哮喘,小便不利及热痹等证。 通过对参环毛蚓及赤子爱胜的对比研究,从活性对比研究中可以看出,两种蚯蚓在纤维平板试验中均具有纤溶活性,并且活性大小相近,从酶谱研究来看,两种蚯蚓所含蛋白质分子量相近,但也有一定差别,通过PCR分析,二者亲缘也相对较近,临床上应用的蚯蚓产品,经过研究表明也是相对较粗的产品。 本文对参环毛蚓中的溶栓活性成分进行了较为深入的研究,以对凝血时间为指标跟踪其中的活性成分,用盐析法、膜分离法、CM-sepharose、DEAE-sephadex-A50、sephacryl-S200、sepharose EE等凝胶层析,分离纯化广地龙中溶栓活性成分,得到5个蛋白酶,其中一个蛋白酶具有较强活性,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)进行了分子量测定分别为:>97000、60500、47900、28100、26300,用氨基酸自动分析仪分析了其中的氨基酸组成,通过氨基酸序列分析仪分析了N端基序列等相关数据测定,其N端序列为Gln-Ile-Gly-Gly-Thr-Asn-Ala-Ser-Pro-Gly-Glu-Phe-Pro-Pro-Gln-Leu-Ser-Gln-Thr。 确立了参环毛蚓药材的质量标椎。以纤溶活性溶圈大小为指标,对参环毛蚓进行提取工艺考察,并对提取物进行了包括活性、指纹图谱质量标准研究。并对参环毛蚓提取物以动-静脉旁路模型实验进行了体内抗栓研究。
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