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银屑病,中医称“白疕”,是一种以红斑鳞屑为主要特征的慢性、复发性、炎症性皮肤病。其确切的病因仍有待研究,目前较公认的观点是由遗传、环境等多种因素相互交织作用的多基因遗传病。T细胞活化是银屑病发病机制中的关键一步,而T细胞活化又受到细胞因子与多种信号通路的调控。有研究称,Notch信号通路的活化与银屑病的发生关系密切,在银屑病患者真皮中Notch信号处于活化状态,外周血T细胞中,Notch-1、2受体表达升高,传导活化信号的能力亦随之增强。Hes-1基因作为Notch通路下游的关键靶基因,可间接地反映Notch信号通路表达的强弱。因此,调控Notch信号通路可能是治疗银屑病的新手段。中医认为“血分郁热”是银屑病的关键病机,针对这一核心病机,白彦萍教授以清热凉血解毒中药为主要成分,研制出治疗血热型银屑病的经典方药——清热凉血方(祛银颗粒),其良好的临床疗效已通过前期的随机、单盲、平行对照的临床研究及动物模型研究得到了证实,但其具体作用机制和作用靶点尚不完全清楚。目的：本研究以揭示血热型银屑病患者CD4+T细胞中Notch-1受体表达程度,探讨清热凉血方对Notch信号通路激活的细胞学体外模型的影响,从而阐明清热凉血方通过调节Notch信号通路治疗银屑病的作用机制。方法：以血热型银屑病患者外周血CD4+T淋巴细胞为研究对象,用实时荧光定量PCR、Western-blot技术检测CD4+T细胞中Notch-1受体的表达；观察植物血凝素(PHA)刺激CD4+T活化的时间及浓度,通过对不同浓度的Jagged-1融合蛋白进行筛选,寻找建立Notch-1信号通路细胞学体外激活模型的最佳浓度；制备清热凉血方低、中、高剂量及生理盐水的含药血清；用实时荧光定量PCR法检测各组含药血清对细胞模型中Hes-1mRNA表达的影响；CCK-8法检测CD4+T细胞的增殖抑制情况；用ELISA法检测各组含药血清对细胞培养上清分泌NF-α、IL-2、IFN-γ的水平变化。结果：(1)Notch-1受体在血热型银屑病患者外周血CD4+T细胞中表达较健康人明显升高,两者间有显著性差异(P<0.01)。(2)PHA刺激CD4+T细胞48小时,浓度为lOug/ml较5ug/ml的CD4+T细胞增殖及分裂能力强,两者差异有显著统计学意义(P<0.01)。(3)浓度为0.5ug/ml的Jagged-1融合蛋白作用CD4+T48小时后,可激活Notch-1信号通路,CD4+T细胞表达下游靶基因Hes-1 mRNA的水平比空白组升高,CD4+T细胞增殖能力增强,差异有统计学意义(P<0.05),结果提示建立了Notch-1细胞学体外激活模型。(4)与模型对照组相比,清热凉血方中、高剂量组Notch信号通路下游的激活靶基因Hes-1 mRNA表达均较少,差异具有统计学意义(P<0.05)；同时,中、高剂量组CD4+T细胞分泌的TNF-α、IFN-γ因子较少,IL-2因子较多(P<0.05)。另外,中、高剂量组较低剂量组差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：Notch-1受体在血热型银屑病患者外周血CD4+T细胞中呈现高表达状态。Jagged-1融合蛋白可一定程度激活Notch信号通路,从而促进血热型银屑病患者外周血中CD4+T细胞的增殖活化。提示在血热型银屑病发生发展中,Notch信号通路可能与调节银屑病免疫的T细胞的增殖活化有密切关系。清热凉血方具有抑制血热型银屑病患者Notch-1信号通路的激活,从而减少CD4+T细胞分泌TNF-α、IFN-γ因子,促进其分泌IL-2因子的作用,并且,相较低剂量组,中、高剂量组的作用时间可持续更长。