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类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）是一类以慢性滑膜炎、持续的全身性炎症和产生自身抗体（如类风湿因子和抗瓜氨酸肽抗体）为特点的系统性疾病,可造成关节内软骨和骨质的破坏,导致关节功能障碍,甚至残废,还能造成心血管系统和肺脏的并发症。RA的发病归功于基因和环境的相互作用,50%的病因可归功于基因方面的因素,而吸烟则是主要的环境因素。在我国RA的发病率为0.5%-1%,每年约5/10万-50/10万的新发病例。通过基因组分析,RA中有多条基因发生表达改变或功能异常,有研究报道,STAT4和CD40在RA和其它的自身免疫性疾病中均发生显著上调。通过研读文献和前期研究,我们获取30例活动性RA患者和12例仅患关节外伤的健康人对照的滑膜组织,做Q-PCR和Western Blot分析,发现RA患者的滑膜组织中TRIM3和Fox O3a的表达均显著下调。我们分别获得TRIM3和FoxO3a的过表达慢病毒构建以及TRIM3的shRNA和Fox O3a的shRNA,并转染到关节炎滑膜成纤维细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）中,研究二者过表达或被沉默后对FLS的功能的影响。我们转染TRIM3的过表达慢病毒构建pLVX-puro-TRIM3到FLS后,ELISA和Q-PCR检测FLS的IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平,发现FLS的IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌下降;CCK8检测FLS的增殖,Western Blot检测CyclinD、PCNA、p53和p21的表达,发现FLS的增殖受到抑制,CyclinD和PCNA的表达显著下调,p53和p21的表达显著上调;Western Blot检测p38的磷酸化水平,发现其磷酸化水平显著下降,加入TRIM3的shRNA后,发现p38的磷酸化水平显著增加。这表明TRIM3抑制p38的磷酸化,通过p38通路抑制FLS的增殖。我们进一步研究TRIM3对T细胞和B细胞的功能的影响,转染pLVX-puro-TRIM3到T细胞,ELISA和Q-PCR检测T细胞分泌IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和BAFF的水平,结果显示T细胞IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和BAFF的分泌水平显著下降。从RA患者的外周血中分离自身反应性B细胞,即CD19+CD27-IgD+IgMlow/-B细胞,转染p LVX-puro-TRIM3,发现转染后B细胞的增殖受到抑制,B细胞的Syk和BLNK的磷酸化水平下降。这表明,TRIM3的过表达会导致T细胞分泌细胞因子的能力下降,并抑制B细胞的增殖和活化。我们将FoxO3a的过表达构建pLVX-puro-FoxO3a转染到FLS细胞,发现FLS的IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌减少,FLS的增殖被抑制;Western blot检测相关信号通路蛋白的磷酸化水平,发现AKT的磷酸化水平减少;转染Fox O3a的shRNA后,发现NF-κB、CyclinD1和PCNA的表达升高,FLS的增殖也受到促进,这表明FoxO3a通过PI3K/AKT通路抑制FLS的增殖。我们进一步研究Fox O3a的过表达对T细胞和B细胞的功能的影响,结果显示FoxO3a过表达后不影响T细胞的IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和BAFF的分泌,但能抑制B细胞的增殖。整理RA中FoxO3a和TRIM3的表达的数据,发现TRIM3的mRNA的表达水平与FoxO3a的mRNA的表达水平呈正相关。我们转染pLVX-puro-FoxO3a到FLS,发现TRIM3的表达上调,我们抽提FLS细胞的总蛋白,做pull-down和Western blot进一步检测二者有无相互结合,结果显示FoxO3a和TRIM3无蛋白相互结合。综上所述,我们的研究表明,在RA中,TRIM3的表达显著下调,而TRIM3能抑制FLS细胞的IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,并通过抑制p38的磷酸化和p38通路来抑制FLS的增殖,TRIM3能抑制T细胞的IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和BAFF的分泌并抑制B细胞的增殖和活化;FoxO3a的表达也显著下调,而且FoxO3a可上调TRIM3的表达,FoxO3a可抑制FLS的IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,并通过PI3K/AKT通路抑制FLS的增殖,还可抑制B细胞的增殖。以上数据表明,RA中,TRIM3和FoxO3a均表达下调,但二者均负向调节FLS的炎症因子的分泌及细胞增殖,并负向调节机体T细胞和B细胞的功能,从而致使RA患者的病变部位的微环境复杂多变,导致持续的炎性病变,这为RA的复杂发病机理提供了理论基础。我们的研究也表明TRIM3有潜力作为防治RA的靶标。