菠萝蜜种质遗传多样性及果实性状分级标准的探讨

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菠萝蜜(Artocarpus heterophyllus Lam.)原产印度,1000多年前引入我国,为我国著名的热带、南亚热带果树之一。菠萝蜜传统上以实生繁殖为主,种质遗传杂合度高,性状变异大。本研究在建立菠萝蜜AFLP分析技术体系的基础上,构建了我国50个菠萝蜜种质的DNA指纹图谱,对其遗传多样性进行了分析,并对我国菠萝蜜的起源进行了初步探讨。同时对菠萝蜜的72份种质资源果实的数量性状进行测定和统计分析,提出我国菠萝蜜种质资源评价系统中这些性状的数值分级指标,为我国菠萝蜜种质资源描述系统数量化、规范化的建立奠定基础。 1 通过对各主要影响因素(DNA提取,PCR条件,引物筛选)的研究,建立了适于菠萝蜜AFLP分析的技术体系。技术体系为,酶切总体积中含DNA250ng,EcoRⅠ和Mse Ⅰ各0.3 U,37℃酶切3h,再在65℃温浴2h 30min;复性条件为65℃10min,37℃ 10min,25℃ 10min, 4℃ 25min,酶切完成后加入连接液,25℃连接2h以上(或室温过夜),连接产物稀释5倍后用于预扩增,预扩增体系中EcoRⅠ和MseⅠ引物均含1个选择性碱基;预扩增产物稀释50倍后用于选择性扩增,选择性扩增体系中,EcoRⅠ和MseⅠ引物均含2-3个选择性碱基,选择性扩增完成后,加入20 μlLoading buffer(上样缓冲液),95℃变性5min,立即冰浴,置于-20℃下备用;取5μl变性后的选择性扩增产物在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳,电泳完毕后,对胶板进行固定、染色、拍照等银染程序。 2 用AFLP标记对我国广东、海南、云南等地的50份菠萝蜜种质进行了分析,总DNA进行EcoRⅠ/MseⅠ酶双酶切,从90对选择性扩增引物对中共筛选出多态性高的8对引物,获得320条带,利用其中的65条相对清晰、可靠的谱带建立0,1 矩阵,分别用UPGMA法构建树状图和PCA法绘制主成份分析图。结果表明各份材料间的遗传相似系数在0.062-0.780之间,菠萝公(即只开花不结果)种质YN-XSQ9单独聚为一类,干包、湿包类型种质不能单独聚类。但地理分布相同的种质可相对聚类(如湛江种质、海南种质单独聚类)。云南种质具有丰富的遗传多样性,与海南、广东种质混聚。 3 进一步的AFLP分析结果表明,巴基斯坦种质可以单独聚类,支持Schnell的观点;我国沿海地区菠萝蜜资源与巴基斯坦、马来西亚种质亲缘关系相对较近,云南种质独立于国外种质之外,表现较高的遗传多样性,且呈分散分布状态。据此,提出云南可能是菠萝蜜基因的次生中心或次生中心之一。 4 对菠萝蜜72份种质资源的小花发育率、果心重、单果重、种子产率、果皮厚度、可食率、可溶性固形物等7项指标进行测定和统计分析,提出我国菠萝蜜种质资源评价系统中这些性状的数值分级指标,为我国菠萝蜜种质资源描述系统数量化、规范化的建立奠定基础。
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