绿色植物的光合作用对于人类的生产和生活具有着不可或缺的重要价值,因此,对于光合作用的主要反应场所——叶绿体的研究一直以来都受到各国科学家的广泛关注。光合器官的正常分化和发育是植物细胞进行光合作用的前提条件,这一过程受到多种核基因和质体基因的共同控制和调节。拟南芥(Arabidopsis thaliana)PALE CRESS(PAC)基因是叶绿体发育过程中所必需的重要核基因之一,其突变体几乎完全丧失了发育出成熟叶绿体的能力。为了阐明PAC蛋白参与调控叶绿体发育的机制,我们利用酵母双杂交系统对PAC的互作蛋白进行了筛选,取得了如下主要结果:1.利用瞬时表达技术研究了PAC蛋白在植物细胞中的定位情况,确定了PAC蛋白定位于植物细胞的叶绿体中。2.通过酵母双杂交系统对PAC蛋白进行了大规模的互作蛋白筛选工作。经过两次酵母文库筛选,确定了214个阳性单克隆。这些阳性单克隆中,鉴定出了78个读码框正确的捕获蛋白基因,其中19个属于定位到叶绿体内的蛋白。这些叶绿体蛋白多数都与质体基因的转录和翻译过程有关,包括多种核糖体蛋白,核糖体RNA,转录后加工因子,翻译起始因子等。3.对筛选到的捕获蛋白Y79进行了小规模的酵母双杂交互作验证。重新克隆了叶绿体发育关键蛋白Y79的非跨膜可溶性肽段的cDNA,在酵母中进行了其与PAC的互作验证。4.构建了原核表达载体pET28a-PAC,实现了PAC蛋白的可溶性原核表达和纯化。5.利用PAC蛋白作为抗原,对家兔进行免疫处理,获取了PAC蛋白的多克隆抗体,为进一步的蛋白互作验证提供了所需的实验材料。综上所述,通过筛选PAC蛋白的互作蛋白因子和多克隆抗体的制备为进一步研究PAC在叶绿体发育过程中的分子机制提供了理论与实践基础。