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猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea，PED）是引起猪以腹泻、呕吐和脱水为主要特征的肠道传染病。不同年龄和不同品种的猪均易感，哺乳仔猪死亡率达95%以上。近年来，PED的流行区域有逐渐扩大的趋势，在世界各地广泛传播，造成巨大的经济损失。因此，PED的及时确诊和防治研究具有重要的意义。本试验首先将经RT-PCR鉴定为PEDV阳性的腹泻仔猪粪便，小肠及内容物样品，在Vero细胞上连续传代，分离病毒，并通过稳定的细胞病变、病毒的TCID50测定、RT-PCR扩增试验、IPMA、间接ELISA试验等方法对该分离毒进行了鉴定，并进行连续传代。试验结果表明：病毒盲传22代，未出现明显的病变，第23代48h出现可见CPE。为进一步证明这种病变是由PEDV所引起的，本试验采用RT-PCR技术扩增PEDV S基因，结果为阳性；单层过氧化物酶试验细胞胞浆中出现弥漫状棕色着染，说明细胞感染PEDV；间接ELISA检测，判断此细胞培养毒为阳性；对第23代病毒测定TCID50结果为10-2.5/0.05ml。由以上的试验可以证明从粪便里分离出的这株病毒为PEDV，此毒株的获得为我国研究河北地区PEDV的血清学、免疫学、病原生物学特性以及疫苗的研制等提供了重要的物质基础。为了提高病毒在Vero细胞上的产量，本试验从猪肠道黏膜基因组中扩增出pAPN-SPC段基因，插到带有EGFP的真核细胞表达载体pEGFP-N1中，经BamHI及EcoRI酶切鉴定正确后转染Vero细胞，构建了能够表达猪pAPN-SPC段的真核细胞表达载体pEGFP-N1-pAPN-SPC，并在Vero细胞中进行有效表达，24h荧光显微镜观察荧光亮度较弱，48h后荧光亮度较强，然后用G418进行筛选获得转染后的阳性细胞。通过RT-PCR检测到目的条带，表明pAPN-SPC基因存在于基因组中，通过Western-bloting观察到重组质粒转染后的细胞产物中显示52ku的条带，表明pAPN-SPC蛋白在Vero细胞中获得表达。最后用荧光定量PCR检测此细胞系对病毒量增殖的影响，利用2-△△CT法，得出转染组的数值是对照组的1.17倍，病毒量明显提高，表明此人工建立的细胞系能够有效提高病毒的产量，对进一步研究PEDV感染机制及pAPN功能等都有较高的参考价值。