绿脓杆菌是奶牛乳腺炎上一种极为罕见且棘手的革兰氏阴性杆菌,由其产生的乳腺炎相通常为慢性或亚临床感染。随着抗生素的滥用以及复杂的耐药机制,使耐药菌株得以选择性地进化,导致绿脓杆菌的多重耐药问题日益突出,严重威胁人类与动物的健康。鉴于江苏部分地区规模化牧场的奶牛乳腺炎源病原菌流行病学及耐药情况不明,本研究运用细菌培养和16SrDNA的方法对江苏地区临床乳腺炎样品进行病原菌的分离鉴定,旨在了解江苏省部分地区奶牛乳腺炎源绿脓杆菌的流行情况,提出优化治疗方案,揭示江苏地区牧场诱导乳腺炎感染致病菌的流行病学基础,以期为有效控制奶牛乳腺炎发生以及科学防治提供理论依据。通过测定绿脓杆菌耐药表型、β-内酰胺类抗性基因携带情况及毒力基因分布,在药敏试验的基础上,对绿脓杆菌进行MLST分子分型,分析江苏部分地区奶牛乳腺炎源绿脓杆菌ESBLs主要耐药基因型和毒力基因及流行情况,探究其耐药与毒力的相关性,为牧场防控产ESBLs绿脓杆菌的传播提供参考。结果如下:本研究选择苏中（扬州、泰州）、苏南（张家港）地区三个规模化牧场,共采集临床型乳腺炎奶样68份,细菌分离鉴定结果显示:共有61份奶样中检出病原菌,整体样品检出率为89.71%;分离的菌株数为260株,其中绿脓杆菌数为52株,绿脓杆菌的检出率为20%;金黄色葡萄球菌为102株,检出率为39.13;肺炎克雷伯菌为46株,检出率为17.66%;大肠杆菌为30株,检出率为11.48%。采用KB纸片扩散法,对照2021版CLSI指导标准,对52株绿脓杆菌菌株的11种抗生素的药敏试验进行检测,结果显示,绿脓杆菌对林可霉素、青霉素、阿莫西林和头孢噻吩具有高度的耐药性,耐药率分别达到了 100.0%,98.1%、59.6%、50.0%。对环丙沙星、四环素、哌拉西林、亚胺培南和美罗培南敏感。5重耐药占比达30.77%,是多重耐药比例最高的。采用双纸片法对绿脓杆菌进行产ESBLs的初步筛选,52株受试绿脓杆菌有8株产ESBLs酶,阳性率为15.38%。七种主要的ESBLs基因鉴定结果表明,HSV基因检出率最高,为96.15%。GES检出率为36.54%,TEM检出率为11.54%,VEB和CTX的检出率都为5.77%;同时,52株绿脓杆菌都不携带OXA和PER基因。MLST分型结果显示:ST277为绿脓杆菌的优势型。毒力基因结果表明:exoS、exoT、exoY和pyo毒力基因均呈阳性,且4种毒力基因与耐药基因SHV之间极显著相关（P＜0.01）。本研究通过江苏部分地区牧场的奶牛乳腺炎源流行病学调查及耐药表型和毒力基因等分析研究,揭示了绿脓杆菌在奶牛乳腺炎临床病例中的广泛存在情况,且存在多重耐药特性,作为条件致病菌,绿脓杆菌的流行分布与耐药和毒力特性对临床保证奶牛乳腺健康极为重要,研究结果为江苏地区奶牛临床乳腺炎的防治提供有效实验依据。