高纤维素降解放线菌的筛选与功能鉴定

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:qiyueliuhua
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本研究从不同生境中筛选得到一株高纤维素降解放线菌SD1-4,通过形态、生理和分子研究,初步鉴定为链霉菌(Streptomyces sp.)。对SD1-4液态发酵产酶条件进行优化,结果表明:初始pH为8.0,最适温度为39℃,最适氮源为酵母膏,最佳无机盐添加量为60mgKCI和15mg CaCl2,最佳灭菌时间为40min、最适装液量为50ml/250ml;0.15%Triton X-100抑制产酶,0.05%Triton X-100促进产酶,PEG8000和吐温-20两种浓度均呈促进作用,SDS均呈抑制作用;第9天产酶达到高峰。对天然碳源(菌草)的研究表明:象草叶为最适碳源;筛选能源草的具体指标为高纤维素、低直链淀粉、低葡萄糖、低果糖、高蔗糖、高蛋白质含量;筛选种质资源的统计学工具为相关分析、主成分分析、回归分析和聚类分析,而灰色关联分析和通径分析不适合。象草营养成分含量(可溶性糖为9.04%、可溶性蛋白质为3.37%时,淀粉含量为5.95%时,粗纤维素含量为65.95% )为象草发酵的最佳成分含量。采用Box-Bohnken设计,以最终的纤维素酶产量作为研究目标,构建纤维素酶产量(内切酶、外切酶和糖苷酶)和7个因子(温度、pH、颗粒大小、蛋白胨浓度、湿度、接种量和时间)之间的关系模型,比较了GA-ANN、ANN和RSM在优化能力上的差异,优化条件下为0.869、0.906和0.867(R值),相比不优化条件的0.796、0.881和0.840,表明GA-ANN在捕捉系统非线性行为的独特优势。通过PEG浓缩、硫酸铵沉淀、乙醇洗涤和Sephadex G-200、DEAE A-50、Sephadex G-200,从SD1-4胞外粗酶液中分离得到一种内切葡聚糖酶,经SDS-PAGE检测为单一条带,分子量约为38KD,能水解CMC-Na,最适温度为60℃和pH值为7.0,Vmax、Km分别为22.57U·ml-1·min-1和0.14%;0.2mM Co2+对该酶有较强的促进作用,0.8 mM Co2+对该酶有弱抑制作用。
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