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致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是我国水产养殖中的常见病原菌,属于条件致病菌,可引起多个养殖品种发生季节性、爆发性传染病。近年来,嗜水气单胞菌对包括团头鲂在内的多个淡水养殖品种的危害日益严重,造成了严重的经济损失。团头鲂(Megalobrama amblycephala)是我国特有的草食性养殖品种,具有良好的市场需求。嗜水气单胞菌引起的细菌性出血病对团头鲂养殖的危害最为严重。本研究主要对湖北省、江苏省爆发嗜水气单胞菌的团头鲂主养地区进行流行病调查,研究嗜水气单胞菌对团头鲂的致病力和耐药性,分析不同地区分离菌株的特性和差异性,主要研究结果如下:1.湖北、江苏两省团头鲂养殖地区嗜水气单胞菌流行病调查2012年7月-2012年9月,对湖北、江苏两省爆发出血病的8个团头鲂养殖地区流行病学进行调查,并鉴定了病原菌为致病性嗜水气单胞菌。调查结果表明,嗜水气单胞菌引起的疾病,发病快,传播迅速,发病初期不易察觉,病情难以控制,容易引发大面积病害的爆发,发病率在65%以上,死亡率一般在30%以上,造成的直接经济损失20%-35%,是团头鲂养殖过程中危害最为严重的病原菌。7月-9月是疾病爆发的高峰期,水温一般在25℃以上。由于养殖水体水质恶劣,在高温条件下,嗜温性的嗜水气单胞菌大量滋生,同时养殖密度大和人工操作的不当导致鱼体的健康受损,鱼体自身免疫机能下降等,导致机体容易感染嗜水气单胞菌,诱发大面积病害的爆发。2.嗜水气单胞菌致病力的研究在分离的嗜水气单胞菌菌株中挑选出8株菌,作为研究对象,对嗜水气单胞菌5种主要毒力基因:气溶素基因(aerA)、丝氨酸蛋白酶基因(ahpA)、溶血素基因(hlyA)、肠毒素基因(altA)、抗金属蛋白酶基因(astA),运用PCR扩增技术检测其携带率;采用倍比稀释法对嗜水气单胞菌培养上清的溶血和溶蛋白效价进行检测;根据急性毒性试验法测定菌株对团头鲂的半数致死剂量(50%lethal dose, LD50)。实验结果表明,检测的毒力基因在分离菌株中分布广泛,携带率分别为100%(8)、75%(6/8)、87.5%(7/8)、75%(6/8)、100%(8/8),E6、X22分别缺少ahpA、altA基因和ahpA、hlyA、 altA基因;6株均携带上述5个毒力基因的菌株,其中有5株菌的溶血价和溶蛋白效价均达到最高的1:128,W25为1:128、1:64,E6和X22分别是1:64、1:64和1:32、1:64;上述6株菌的LDso值在5.0×105~1.0×106cfu/ml之间,E6和X22的LDso值分别为2.4×106cfu/ml和4.0×106cfu/ml。通过比较菌株毒力基因的分布和培养上清的溶血、溶蛋白效价以及对团头鲂的半致死率,可以发现所检测的毒力基因对菌株的致病力密切相关,其中气溶素基因(aerA)、丝氨酸蛋白酶基因(ahpA)、溶血素基因(hlyA)与菌株致病力具有显著相关性,肠毒素基因(altA)、抗金属蛋白酶基因(astA)对菌株致病力的影响相对较小。3.嗜水气单胞菌耐药性的分析研究为了了解不同养殖区分离菌株对抗菌药物的耐药情况,选取25种常见的抗生素,采用药敏试验纸片扩散(K-B)法检测挑选的8株菌的耐药性。实验结果表明,8菌株对各类抗生素的耐药性总体上基本一致,对青霉素类药物均表现为高度耐药,对第三代和第四代头孢类药物均表现高度敏感,对于氨基糖苷类、氟喹诺酮类、磺胺类、四环素类药物,各地区的分离呈现不同程度的耐药性。这主要与药物自身特性、药物的依赖程度和用药的时间长短有关。对于某些具体药物,其耐药性和耐药趋势具有一定的差异。菌株X22的耐药情况最为严重,与其他菌株具有显著差异,可能主要与当地的养殖环境和过度使用抗菌药物有关。菌株W2的耐药率虽然较低,但耐药趋势明显,在选择防治药物时需要重点关注。对湖北省分离的5株菌和江苏省分离的3株菌进行比较,分析结果表明,对先锋霉素V、卡那霉素、恩诺沙星、环丙氟哌酸、四环素、新生霉素的耐药性两省分离菌差异显著。江苏省分离菌对先锋霉素V、卡那霉素、新生霉素高度敏感,而湖北省分离菌则呈现一定程度的耐药性;江苏省分离菌对恩诺沙星、四环素的耐药程度则显著高于湖北省分离菌。对于新生霉素,湖北省分离菌表现出的耐药趋势更加明显,主要是由于两省在药物选择以及使用方式不同,导致了嗜水气单胞菌耐药性的选择差异。