涎腺腺样囊性癌（Salivary adenoid cystic carcinoma, SACC）是最常见的涎腺恶性肿瘤之一，具有嗜神经侵袭的特性，区别于涎腺其它恶性肿瘤。最近研究发现脑源性神经生长因子（Brain-derived Neurotrophic Factor, BDNF）和它的特异性受体酪氨酸激酶受体B（tropomysin-related kinase B, TrkB）在多种恶性肿瘤中呈现过度表达。课题组前期研究表明 BDNF和 TrkB在涎腺腺样囊性癌中的呈现高表达，并证实了TrkB在涎腺腺样囊性癌中的表达强度与其嗜神经侵袭程度相关。　　典型的EMT过程包括细胞丧失极性及细胞间黏附分子，细胞骨架重组，获得成纤维样细胞表型。多项研究表明，EMT在多种恶性肿瘤的侵袭、转移过程中发挥重要作用。尽管EMT与嗜神经侵袭之间的关系罕有报道，但是我们有理由推断，既然EMT能够赋予肿瘤细胞转移、侵袭的能力，它在嗜神经侵袭过程中必然发挥重要作用。越来越多的证据表明，施万细胞样分化可能是一些神经源性恶性肿瘤发生神经侵袭可能机制之一，肿瘤嗜神经侵袭现象可比拟为施万细胞对神经组织的亲和力。　　目前，关于BDNF/TrkB信号通路、EMT以及Schwann细胞样分化之间的关联及其在 SACC嗜神经侵袭过程中作用的研究尚未见报道。本课题通过建立施万细胞与SACC细胞的体外共培养模型，模拟SACC神经侵袭过程中两种细胞之间的相互作用，证明施万细胞通过BDNF/TrkB信号通路促进SACC的EMT和Schwann细胞样分化过程，并用临床SACC标本免疫组化实验加以印证，探讨SACC嗜神经侵袭的可能分子机制。　　第一部分实验　　目的：建立腺样囊性癌细胞与大鼠施万细胞共培养模型，探讨细胞间相互作用时BDNF、TrkB的表达变化情况以及K252a对两种细胞表达BDNF、TrkB的影响。　　方法：采用Transwell系统建立腺样囊性癌细胞与大鼠施万细胞共培养模型，共培养72h后， ELISA法检测各组培养液中BDNF含量， RT-PCR、Western免疫印迹检测两种细胞中BDNF、TrkB表达情况以及用K252a刺激时的变化情况。采用SPSS17.0软件包对实验结果进行统计学处理。　　结果：施万细胞与SACC细胞共培养组的培养基中BDNF的浓度显著高于它们单独培养组中BDNF浓度总和；共培养组的施万细胞表达BDNF的量显著增高，而表达TrkB的量未见明显变化；共培养组的SACC细胞表达TrkB的量显著增加，而表达BDNF的量未见明显变化；TrkB抑制剂 K252a能够显著抑制上述改变；对照组黏液表皮样癌细胞与施万细胞共培养时未发生类似改变。　　结论：BDNF/TrkB信号通路在施万细胞与 SACC细胞相互作用过程中发挥重要作用，但其下游通路的分子机制有待进一步实验研究。　　第二部分实验　　目的：通过腺样囊性癌细胞与大鼠施万细胞共培养模型，研究施万细胞通过BDNF/TrkB信号通路促进SACC细胞EMT发展及其Schwann细胞样分化过程。　　方法：以涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞系为研究对象，利用RT-PCR、Western免疫印迹、免疫荧光染色等方法检测与施万细胞共培养的SACC-83细胞EMT发展及 Schwann细胞样分化相关分子的表达变化情况，细胞摄像及激光共聚焦成像观察SACC-83细胞形态学变化，划痕实验及Transwell嗜神经侵袭实验观察肿瘤细胞运动能力及神经侵袭能力的变化，并通过K252a阻断BDNF/TrkB信号通路观察对其EMT发展及Schwann细胞样分化的影响。采用SPSS17.0软件包对实验结果进行统计学处理。　　结果：与单独培养的SACC-83细胞相比，共培养组的SACC-83细胞形态由椭圆形变为纺锤形及多角形，细胞间连接消失，EMT标志分子E-cadherin表达下调， N-cadherin、Vimentin表达上调，肿瘤细胞运动能力及嗜神经侵袭能力明显增强，同时共培养组的肿瘤细胞表达施万细胞标志分子S100A4、GFAP的量显著上调；通过K252a阻断 BDNF/TrkB信号通路能够显著抑制 SACC-83细胞的EMT发展及Schwann细胞样分化。　　结论：施万细胞能够通过 BDNF/TrkB信号通路促进 SACC细胞的EMT发展及Schwann细胞样分化，肿瘤-神经之间的相互作用可能是SACC嗜神经侵袭的可能机制之一。　　第三部分实验　　目的：研究TrkB、E-cadherin和S100A4在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及其与SACC临床嗜神经侵袭之间的关联。　　方法：采用免疫组化染色检测187例涎腺腺样囊性癌和20例正常涎腺组织中TrkB、E-cadherin和S100A4的表达情况，并分析其与SACC临床嗜神经侵袭之间的关联。采用SPSS17.0软件包对实验结果进行统计学处理。　　结果：与正常涎腺组织相比，SACC侵犯的外周神经组织周围，TrkB、S100A4的染色强度显著增高，E-cadherin的染色强度显著减弱，差别具有统计学意义；SACC标本中 TrkB以及 S100A4的表达水平与临床嗜神经侵袭呈现正相关， E-cadherin的表达与临床嗜神经侵袭呈现负相关；TrkB的表达水平与E-cadherin的表达呈现负相关，而与S100A4的表达呈现正相关。　　结论：TrkB、E-cadherin和S100A4的表达与SACC临床嗜神经侵袭密切相关，印证了施万细胞与SACC细胞共培养实验的结果。