乳制品中ELISA-AFM1检测方法的建立和应用

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黄曲霉毒素是黄曲霉、寄生曲霉等产生的代谢产物,是导致人类罹患癌症的原因之一。黄曲霉毒素M1(AFM1)是动物摄入黄曲霉毒素B1B后在体内经羟基化代谢的产物,动物进食被黄曲霉毒素BB1污染的饲料后,乳中会出现AFM1,给消费者特别是婴幼儿带来严重的健康陷患。因此,各个国家和地区都对动物乳中的AFM1进行严格的限量。由于目前尚缺乏公认有效的且可供工业上大规模应用的黄曲霉毒素的预防和去除的方法,所以及时对食品中黄曲霉毒素进行定量检测是目前最大限度地降低黄曲霉毒素危害的最好措施。本文对乳制品中AFM1的酶联免疫检测方法进行了详细的研究,以期获得一种简便、准确的检测方法。建立了乳制品的ELISA-AFM1检测方法。选取配方奶粉作为方法建立的实验对象,通过对提取试剂、提取方法和净化方法的优化实验,选取80%甲醇水作为提取溶剂,90℃加热回流15min为提取方法,三氯甲烷萃取净化,最后经ELISA检测。结果提示本方法的精密度令人满意,平行结果相对偏差少于5%,向样品中分别添加0.25μg/kg、0.50μg/kg、1.0μg/kg3个浓度水平的AFM1标准品,平均回收率分别为89.9%、91.6%、90.1%,检测灵敏度0.05μg/kg。将已建立的ELISA-AFM1检测方法与标准方法进行比对。应用ELISA-AFM1检测方法、GB5413.37-2010乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定第三法免疫层析净化荧光分光度法和GB5009.24-2010食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定,分别对10个配方奶粉样品进行比对研究,结果表明三种检测方法结果间的相对偏差少于2%,无显著性差异。将ELISA-AFM1检测法应用于其它乳制品的分析。从超市随机购买配方液体乳制品、半固体乳制品和固体乳制品,每个种类三个样品,每组样品三个平行实验,结果显示相对偏差少于10%。每种样品添加0.50μg/kg AFM1标准品,回收率在88.0%~93.2%之间,令人满意。本文建立的ELISA-AFM1检测方法,检测结果与薄层色谱法、免疫层析净化荧光分光度法无显著性差异,且操作步骤简单,价格相对低廉,接触毒素浓度低,实验仪器的要求不高,可推广应用。
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